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目的: 研究本实验室分离提取的米邦塔仙人掌果胶(milpa alta cactus pectin,MCP)对小鼠慢性温和型应激模型抑郁样症状的改善作用;研究MCP对小鼠慢性温和型应激模型学习记忆的改善作用,并初步探讨其作用机制;研究GABAA激动剂WAY-141839对MCP处理小鼠慢性温和型应激模型海马CA1区突触可塑性的影响。 方法: 采用15-20g健康雄性昆明种小鼠,Morris水迷宫(MWM)筛选之后,将合格小鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、MCP低剂量组(50mg/kg)、MCP中剂量组(100mg/kg)、MCP高剂量组(200mg/kg)、阳性对照组(20mg/kg)。采用慢性温和型应激(chronic mild stress,CMS)方法造模6周,造模期间空白对照组与模型组每天灌胃给予双蒸水0.1ml/10g,另外四组分别按照对应药物浓度每天灌胃给药。造模期间,每周三从13:00起对小鼠进行断水断食处理,8h后称量小鼠体重;于21:00-周四9:00测试小鼠糖水与双蒸水消耗量,并计算小鼠糖水偏爱性;造模结束24h后进行悬尾实验,48h后进行强迫游泳实验,96h后进行MWM实验。完成以上行为学实验后将小鼠麻醉、断头取脑,制备400μm冠状切片,记录海马CA1区兴奋性突触后电位以及WAY-141839对兴奋性突触后电位LTP维持和诱导的影响。 结果: 1.MCP对CMS小鼠体重变化率的影响: 从CMS造模第1周起,模型组小鼠体重变化率明显低于空白对照组(P<0.01);至造模结束时,与模型组比较,MCP中剂量显著增加CMS小鼠体重变化率(P<0.05),MCP高剂量及Flu能更为显著的增加CMS小鼠体重变化率(P<0.01)。 2.MCP对CMS小鼠糖水偏爱性的影响: 从CMS造模第2周起,模型组小鼠糖水偏爱性明显低于空白对照组(P<0.01);至造模第5周及第6周,MCP中剂量、MCP高剂量及Flu显著增加CMS小鼠糖水偏爱性,与模型组比较有显著性差异(P<0.05)。 3.MCP对CMS小鼠悬尾实验潜伏期及累计不动时间的影响: 与空白对照组比较,模型组小鼠潜伏期显著缩短(P<0.01),累计不动时间显著延长(P<0.01);与模型组比较有,MCP高剂量组显著增加CMS小鼠潜伏期(P<0.05),MCP中剂量、MCP高剂量及Flu显著缩短CMS小鼠累计不动时间(P<0.01)。 4.MCP对CMS小鼠强迫游泳实验潜伏期及累计不动时间的影响: 与空白对照组比较,模型组小鼠潜伏期显著缩短(P<0.01),累计不动时间显著延长(P<0.01);与模型组比较有,MCP各给药组并没能显著延长CMS小鼠潜伏期(P>0.05),MCP高剂量及Flu显著缩短CMS小鼠累计不动时间(P<0.05)。 5.MCP对CMS小鼠空间学习记忆的影响: 学习训练结束时,与空白对照组比较,模型组小鼠逃逸潜伏期明显增加(P<0.01),游泳总路程显著增加(P<0.01),在目标象限游泳路程/游泳总路程明显降低(P<0.05);与模型组比较,MCP中剂量、MCP高剂量及Flu明显降低CMS小鼠逃逸潜伏期(P<0.01)及游泳总路程(P<0.05),但对小鼠在目标象限游泳路程/游泳总路程仅表现出一定的改善趋势,无显著性影响(P>0.05)。CMS造模、MCP及Flu给药对小鼠游泳速度均无影响(P>0.05)。空间探索实验结果显示,模型组小鼠穿越平台次数显著低于空白对照组(P<0.01),MCP中剂量、MCP高剂量及Flu显著增加CMS小鼠穿越平台的次数。 6.MCP对CMS小鼠海马CA1区突触可塑性的影响: CMS造模显著降低小鼠海马CA1区长时程增强,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.05);MCP中剂量、MCP高级量及Flu显著改善CMS小鼠LTP,与模型组比较有显著性差异。CMS造模对小鼠海马CA1区输入/输出曲线(I/O)无显著影响,但MCP中剂量组及MCP高剂量组I/O明显高于模型组(P<0.05);Flu对CMS小鼠I/O曲线无明显影响。模型组双脉冲比率显著低于空白对照组(P<0.05),MCP高剂量组及阳性对照组双脉冲比率明显高于模型组(P<0.05)。 7.WAY-141839对MCP处理CMS小鼠海马CA1区突触可塑性的影响: ⑴ WAY-141839对MCP处理CMS小鼠海马CA1区LTP维持的影响:高频刺激(HSF)后30min,给以2.3μM WAY-141839,观察到各组LTP之间无显著性差异。我们以给予WAY-141839后所得各组LTP均值与正常记录所得各组LTP均值做差,结果显示WAY-141839明显降低空白对照组、MCP高剂量组及阳性对照组LTP;与之相反的是模型组、MCP低剂量组和MCP中剂量组LTP却明显增加,但MCP中剂量组与模型组比较,其增加幅度较低(P<0.05)。 ⑵WAY-141839对MCP处理CMS小鼠抑郁模型海马CA1区LTP诱导的影响:在WAY-141839作用下各组基线呈现不同程度的下降,与空白对照组比较,模型组下降程度明显降低(P<0.01);与模型组比较MCP中剂量组和MCP高剂量组基线下降程度显著增加(P<0.01)。在WAY-141839作用下各组LTP间并无显著性差异,以WAY-141839后所得各组LTP均值与正常记录所得各组LTP均值做差,结果显示WAY-141839显著降低空白对照组、MCP中剂量组、MCP高剂量组及阳性对照组LTP,而增加模型组、MCP低剂量组LTP,且MCP低剂量组LTP增加明显高于模型组(P<0.01)。 结论: MCP呈剂量依赖性的缓解CMS小鼠的抑郁样症状及空间学习记忆能力,中剂量(100mg/kg)和高剂量(200mg/kg) MCP作用尤其明显。MCP可能通过缓解CMS小鼠海马CA1区突触可塑性损伤而改善学习记忆。WAY-141839实验结果表明MCP能较好的缓解CMS小鼠海马CA1区抑制性突触传导损伤。