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目的:心血管疾病（CVD）是威胁全人类生命健康的重要因素之一,动脉粥样硬化（AS）是其主要病理生理学基础。内皮细胞损伤作为AS形成的始动环节,通过诱导血管慢性炎症反应促进CVD发生发展。金雀异黄素（GEN）具有抗AS效应,但作用机制尚未完全阐明。本研究旨在探究GEN对脂多糖（LPS）诱导的小鼠血管慢性炎症反应的影响及是否与调控miR-21表达有关。方法:1.高脂饮食喂养C57 BL/6小鼠联合腹腔注射LPS（2 mg/kg,3次/w）构建小鼠血管慢性炎症反应模型。小鼠随机分为对照组、LPS模型组、PDTC组（10 mg/kg,1次/d）、GEN低剂量组（5 mg/kg,1次/d）、GEN中剂量组（10 mg/kg,1次/d）和GEN高剂量组（20 mg/kg,1次/d）。20周后,RT-q PCR检测主动脉或外周血单个核细胞（PBMC）中TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2、NF-κB p65 m RNA及miR-21表达,Western Blot和IHC分析主动脉COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白水平,IF分析主动脉NF-κB p65蛋白表达。2.高脂饮食喂养C57 BL/6小鼠联合腹腔注射LPS（2 mg/kg,3次/w）、胃灌注GEN（10 mg/kg,1次/d）16周后,尾静脉注射miR-21拮抗剂（25 mg/kg,1次/3d）。拮抗剂注射4周后,RT-q PCR检测主动脉或PBMC中iNOS、COX-2、NF-κB p65 m RNA及miR-21表达,Western Blot和IHC分析主动脉COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白水平,IF分析NF-κB p65蛋白表达。3.LPS（0.25、0.5、1.0μg/m L）处理HUVE-12细胞24 h。RT-q PCR检测TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κB p65 m RNA表达,Western Blot分析COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白水平,构建LPS诱导血管内皮细胞炎症损伤模型。随后,使用不同浓度GEN（2.5、5.0、10、20μM）孵育HUVE-12细胞24 h或GEN（10μM）处理HUVEC-12细胞2 h再与LPS（1.0μg/m L）共处理24 h。CCK8检测细胞活力,RT-q PCR检测TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κB p65 m RNA和miR-21表达,Western Blot分析COX-2、iNOS、NF-κB p65蛋白水平。使用慢病毒构建miR-21稳定过表达或敲降HUVE-12细胞系,荧光显微镜下观察GFP蛋白表达,RT-q PCR分析miR-21水平。然后,GEN（10μM）预处理miR-21稳定过表达或敲降细胞系2 h,再与LPS共处理24 h。RT-q PCR检测COX-2、iNOS、NF-κB p65 m RNA表达,Western Blot检测COX-2、iNOS、NF-κB p65、NF-κB p-p65Ser276、AKT、p-AKTSer473蛋白水平,IF分析NF-κB p65蛋白表达。使用GEN（10μM）、IGF-1（100 ng/m L）预处理miR-21稳定敲降细胞系2 h,再与LPS共处理24 h。RT-q PCR检测COX-2、iNOS、NF-κB p65m RNA水平,Western Blot检测COX-2、iNOS、NF-κB p65、NF-κB p-p65Ser276蛋白水平,IF分析NF-κB p65蛋白表达。结果:1.小鼠体重缓慢增长;LPS明显上调主动脉TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2、NF-κB p65 m RNA和蛋白表达,小鼠血管慢性炎症反应模型构建成功。此外,LPS明显促进主动脉和PBMC中miR-21表达,而GEN呈浓度依赖性下调小鼠主动脉炎症相关因子及主动脉和PBMC中miR-21表达,抑制小鼠血管慢性炎症反应。2.miR-21拮抗剂明显下调小鼠主动脉及PBMC中miR-21表达,并协同GEN抑制COX-2、iNOS、NF-κB p65 m RNA和蛋白表达。3.1.0μg/m L LPS明显上调HUVE-12细胞TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κB p65 m RNA和蛋白表达,可用于构建血管内皮细胞炎症损伤模型。此外,GEN不影响血管内皮细胞活力,能抑制LPS诱导的TNF-α、IL-6、COX-2、iNOS、NF-κB p65及miR-21表达。与空载体组比较,miR-21 OE组细胞miR-21表达显著上调,miR-21 KD组细胞miR-21表达明显下调。此外,miR-21过表达促进LPS上调COX-2、iNOS、NF-κB p65、NF-κB p-p65Ser276、p-AKTSer473表达及NF-κB p65核转位,有效拮抗GEN对炎症相关因子的抑制作用,而miR-21敲降作用与之相反。与miR-21 NC+LPS+GEN组比较,IGF-1明显上调COX-2、iNOS、NF-κB p65、NF-κB p-p65Ser276 m RNA或蛋白表达,并促进NF-κB p65核转位,而敲降miR-21明显减轻IGF-1对GEN的抑制作用。结论:GEN通过下调miR-21表达,降低AKT磷酸化水平,抑制LPS诱导的小鼠血管慢性炎症反应。