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研究目的黑斑息肉综合征（Peutz-Jeghers syndrome, PJS）是一种少见的遗传性疾病，以皮肤黏膜色素沉着和胃肠道息肉为特征性表现。PJS患者息肉肿瘤性改变（上皮内瘤变、癌变等）发生率可达3%-6%，同时伴发胃肠道内外肿瘤的发生率是正常人群的4倍，包括大肠、乳腺、小肠、胃及胰腺肿瘤，PJS患者一生中癌的发生率可达37%-93%。PJS患者消化道多发息肉常会引起肠套叠、肠梗阻及消化道出血。其癌变倾向和并发症导致患者反复住院，危害极大。双气囊小肠镜（Double-balloon enteroscopy, DBE）作为一种新的内镜技术，已广泛应用于不明原因小肠出血、克罗恩病、炎症性肠病、小肠息肉以及小肠肿瘤等疾病的临床诊断中，近年来，多项研究报道DBE在小肠疾病的治疗中起到极其重要的作用，尤其是内镜下小肠息肉摘除。PJS的主要致病基因是STK11/LKB1，研究报道大约有30%67%的PJS患者存在STK11/LKB1基因的胚系突变，小部分存在体细胞突变。STK11/LKB1基因突变导致的STK11/LKB1蛋白激酶失活可引起包括PJS的多种疾病的发生。目前，在PJS和散发肿瘤中已经检测出200多种STK11/LKB1基因突变。然而STK11/LKB1确切的致病机制错综复杂，至今未能完全阐明，不同的STK11/LKB1基因突变可能通过作用于细胞活动的不同环节导致疾病发生。因此，研究PJS在DBE下息肉切除的安全性和有效性以及进一步丰富STK11/LKB1基因新的突变位点具有特别重要的理论和实际意义。本研究包括两个部分内容，分别探讨DBE对PJS治疗的安全性和有效性以及Peutz-Jeghers综合征中STK11/LKB1基因突变研究。研究方法第一部分：回顾性分析2010年1月至2014年1月长海医院接受双气囊小肠镜检查和治疗的38例PJS患者的临床资料，通过查阅病例和电话随访获得以下内容：临床特征（年龄、性别、外科手术史）、治疗结果（每次住院切除小肠息肉的数量、每次住院切除大于2cm小肠息肉的数量、每次住院切除小肠息肉的最大尺寸、全小肠检查数）、并发症以及内镜治疗后外科手术发生数。量化值概括为平均值（标准差），不同住院次数之间变量间的差异性采用Friedman检验。P值小于0.05有统计学意义。第二部分：联合应用Sanger测序和MLPA检测技术对17个PJS家系（遗传性家系1个，散发性家系16个）共计18例PJS患者、17例家系正常人，进行STK11/LKB1基因突变筛查。结果第一部分结果：共纳入38例患者（男性14例，平均年龄30.5±11.1岁），平均住院次数为1.4±0.6次，共行双气囊小肠镜102次。随着住院次数的增加，每次住院切除大于20mm的小肠息肉平均数量明显降低（第一次3.4；第二次0.4；第三次0.1；P<0.001）。同样，切除小肠息肉的最大尺寸也明显降低（第一次36.5mm；第二次5.47mm；第三次1.32mm；P<0.001）。1例患者发生术后延迟出血，经内镜下止血夹止血后缓解，3例患者发生小肠穿孔，其中1例保守治疗成功，2例转至外科手术治疗。只有2例患者研究期间因为肠套叠行外科手术治疗。1例患者因小肠息肉癌变死亡。第二部分结果：Sanger测序法检测基因突变：应用Sanger测序对17个PJS家系进行STK11/LKB1基因的突变筛查。结果显示，8例（47.1%，8/17）先证者中检测出6种不同的STK11/LKB1基因突变，包括2个错义突变和4个截短突变，突变均与家系表型共分离，且在8例正常对照中未发现相同突变；其中两种突变与PJS患者合并恶性肿瘤有关，分别为结肠癌和肺癌。所测6种基因突变均符合国际报道，包括2个错义突变（c.521A>G,c.526G>A）和4个缺失突变（c.179180insA, IVS1+1G>A, IVS5+2T>C, IVS5+1G>A）。MLPA技术检测STK11/LKB1基因大片段缺失/重复：应用MLPA技术检测9例Sanger测序未发现STK11/LKB1基因突变的PJS先证者，结果显示，3例（33.3%，3/9）先证者存在STK11/LKB1基因大片段缺失，其中2例为1号外显子缺失（c.-1114-?290+?del），1例为3号外显子缺失（c.375-?464+?del）。MLPA检测家系其他PJS患者和正常成员，提示STK11/LKB1基因大片段缺失与家系表型共分离。结论1.双气囊小肠镜对PJS患者小肠息肉的内镜下切除是安全有效的，并且能够避免急诊外科手术。2.应用Sanger测序和MLPA检测技术测得PJS患者STK11/LKB1基因的突变率达64.7%，筛选得到基因突变位点符合国际报道。