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目的1.探讨miR-17-92在难治性急性淋巴细胞白血病患者淋巴细胞中的表达情况。2.研究miR-17-92在白血病L1210/DDP细胞多药耐药形成中的作用。3.研究复方浙贝颗粒对L1210/DDP细胞的逆转作用,并探讨其逆转多药耐药的可能机制。方法1.用淋巴细胞分离液提取21例经2疗程标准化疗以上未获缓解的难治性急性淋巴细胞白血病(RALL)患者,和15例体内敏感急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血淋巴细胞,应用MTT法检测36例白血病患者淋巴细胞对阿霉素和顺铂的敏感性,从体外实验结果与临床疗效相符患者的淋巴细胞中提取总RNA,应用实时定量PCR的方法检测样品中miR-17-92的表达情况。2.首先构建L1210/DDP耐药细胞系,运用real-time PCR方法检测miR-17-92在L1210/DDP细胞与L1210细胞中的表达差异。利用脂质体Lipofectamine2000将miR-17-92抑制物(miR-17-92sponge)及阴性对照(sponge vector)转染L1210/DDP细胞,构建miR-17-92表达下调的L1210/DDP细胞系。用MTS法检测转染后耐药细胞对顺铂和阿霉素体外药物敏感性。3.采用MTS法检测复方浙贝颗粒对体外培养的白血病亲本细胞L1210,耐药细胞株L1210/DDP的增殖抑制作用,测定非细胞毒性剂量或低细胞毒性剂量的复方浙贝颗粒作用后L1210/DDP IC。变化,通过RT-PCR方法检测复方浙贝颗粒联合阿霉素作用后L1210/DDP细胞miR-17-96和PTEN表达情况。结果1.MTT细胞敏感性实验表明,18例RALL患者IR<30%,为不敏感或耐药：14例体内敏感ALL患者IR>30%,为中度敏感或敏感,故将此32例患者纳入本次研究对象：实时定量PCR实验表明RALI组淋巴细胞中miR-17-92相对表达量为7.12±1.03,化疗药物敏感ALL组淋巴细胞中miR-17-92相对表达量为3.21±0.63,结果显示,与对化疗药物敏感ALL患者组相比,RALI患者淋巴细胞中miR-17-92相对表达量显著升高,p<0.05。2miRNA-17-92在L1210/DDP耐药细胞系中高表达,上调倍数为(1.61±0.01)倍。体外药物敏感性实验表明,转染miR-17-92抑制物的实验组对顺铂和阿霉素的IC3分别为(3.29±0.51)、(1.35±0.13)μg/ml,而转染阴性对照组对上述药物的IC5分别为(6.73±0.82)、(2.66±0.42)μg/m1,在耐药株中抑制miR-17-92在L1210/DDP细胞中的表达,显著增加细胞对顺铂和阿霉素的敏感性。3.非毒剂量筛选结果为1/4中剂量(4g·d-1.kg-1)CZBG药物血清,对细胞基本无毒性,非毒剂量复方浙贝颗粒含药血清对L1210/DDP细胞处理后,L1210/DDP对各组浓度ADR敏感性增加,IC50变为0.36mg/L,复方浙贝颗粒药物血清逆转倍数为7.25,real-time PCR显示,与对照组相比,联合用药组miR-17-92在L1210/DDP细胞中显著低表达,下调倍数为(0.51±0.03)倍,P<0.01,PTEN在L1210/DDP细胞中显著高表达,上调倍数为(1.8±0.1)倍,P<0.01,而与对照组相比,单独使用ADR组miR-17-92和PTEN在L1210/DDP细胞中表达无差异。结论1.miR-17-92在难治性急性淋巴细胞白血病患者淋巴细胞中的表达水平相对较高,这可能与难治性急性淋巴细胞白血病多药耐药的发生发展相关。2.miR-17-92在白血病耐顺铂L1210/DDP细胞中高表达。抑制miR-17-92的表达可增加白血病L1210/DDP细胞对顺铂和阿霉素化疗药物的敏感性,部分逆转耐药。3.复方浙贝颗粒联合阿霉素对白血病耐药细胞株具有显著的逆转作用,其机制可能与下调了miR-17-92和上调PTEN有关.