我国不同地域的典型温石棉对wistar大鼠的氧化损伤作用

来源 :西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuzhaozhihui
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目的探讨我国不同地域的典型温石棉对Wistar大鼠肺部氧化损伤作用及其作用强度比较。方法采集陕西陕南、甘肃阿克塞、青海茫崖、四川新康四大矿区的温石棉,加工成粒径小于10μm的颗粒物。采用激光粒度分析仪测定其粒径,用X射线荧光(XRF)、X射线衍射(XRD)和扫描电镜(SEM)分别对样品的主要化学成分、物相以及形貌结构进行分析。选90只初断乳清洁级Wistar雄性大鼠,随机分为5组(陕西陕南、甘肃阿克塞、青海茫崖、四川新康温石棉染毒组和阴性对照组),每组18只。染毒组采用非暴露式气管滴注的方法,滴注浓度为2.0mg/ml温石棉悬液0.5ml,染毒频率1次/月;阴性对照组采用相同方法滴注灭菌0.9%氯化钠溶液0.5ml。上述5组染毒后,分别在1、3个月和6个月后各处死6只大鼠。进行体质量、肺质量称重,肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察病理形态改变;收集大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),上清液与细胞沉淀离心分离,细胞悬浊液进行白细胞总数及分类计数,上清液用于测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、碱性磷酸酶(AKP)及总蛋白(TP)含量;测定肺组织和血清中活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活力;实时荧光定量PCR法检测肺组织中血红素氧化合酶1(HO-1)和热休克蛋白70(HSP70)基因的表达水平。结果陕西陕南、青海茫崖、甘肃阿克塞矿物粉体样品粒径主要集中在2~10μm,四川新康主要集中在0~2μm。四种典型温石棉的主要化学成分为二氧化硅(Si O2)和氧化镁(Mg O),含少量的三氧化二铁(Fe2O3)、三氧化二铝(Al2O3)等物质,温石棉的产地不同影响各氧化物的含量。XRD分析结果显示,四种温石棉具有典型的温石棉特征峰,镁硅峰值清晰,未检测到已被禁用的闪石类矿物纤维,四种温石棉纤维样品为较硬直的纤维状或针状,有明显的脆性特征,其中四川新康温石棉有团聚现象。青海茫崖和四川新康温石棉染毒组与阴性对照组比较,大鼠体质量增长缓慢,肺质量增加;HE染色显示,四种不同地域的典型温石棉染毒组肺组织出现不同程度的炎性细胞聚集、纤维化,肺泡结构遭到破坏,并且损伤随染毒时间延长而加重。与阴性对照组比较,四种温石棉染毒组在相应时间点,BALF中白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞百分比均不同程度增加,并随染毒时间延长而增多(P<0.05),巨噬细胞百分比相对于阴性对照组减少,并随染毒时间延长有先升高随后降低的趋势(P<0.05);青海茫崖、四川新康和甘肃阿克塞染毒组BALF中LDH的漏出量以及各温石棉染毒组AKP和TP的浓度从染毒1个月开始明显增加,且这三个指标的变化随染毒时间延长呈上升趋势(P<0.05);与相同染毒时间的阴性对照组比较,青海茫崖和四川新康染毒组大鼠肺组织和血清中ROS、MDA的含量分别于染毒1个月和3个月开始增加(P<0.05),SOD活性先升高后下降(P<0.05),随着染毒时间的延长,肺组织和血清中MDA含量升高(P<0.05),SOD活力呈下降趋势(P<0.05)。陕西陕南和甘肃阿克塞温石棉染毒肺组织,在1月时HO-1和HSP70基因表达量比阴性对照组增加(P<0.05);青海茫崖和四川新康温石棉染毒组肺组织HO-1和HSP70基因表达量在染毒1,3月时与阴性对照组比较增加,而在6月时出现明显降低(P<0.05)。结论我国不同地域的典型温石棉都对细胞具有毒性作用,可导致大鼠肺泡上皮—毛细血管屏障损伤以及肺部炎症。四川新康和青海茫崖温石棉可致大鼠体内蓄积过量ROS,MDA含量增加,导致脂质过氧化作用,抗氧化酶SOD耗竭或失代偿,清除自由基的能力下降,HO-1、HSP70基因表达量下降,导致大鼠肺部氧化损伤,提示不同地域的典型温石棉氧化损伤作用可能存在差异。
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