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目的:初步建立蛋类特异性IgE和IgG4的检测方法,并探讨简单的热加工对五种蛋清中抗原的免疫原性的影响。
方法:抗原提取分为未加工组和热加工组。热加工组为100℃去离子水煮10分钟,未加工组不做任何处理。用ELISA法定性检测30例鸡蛋过敏患儿特异性IgE和IgG4水平。另采用瑞典Pharmacia体外抗原(Unicap)测定系统检测蛋清特异性IgE(f1)的阳性率,比较两种方法的符合率。
结果:
⑴初步建立了蛋类过敏原sIgE和IgG4的ELISA反应条件:包被条件鸡蛋和鸭蛋以1:12000,鹅蛋、鹌鹑蛋和鸽蛋以1:16000稀释,血清稀释浓度为1:10,生物素标记的抗人IgE稀释浓度1:2000,辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素稀释浓度1:5000,辣根过氧化物酶标记的抗人IgG4稀释浓度1:2500。
⑵ Phamacia Unicap检测结果37份标本中,有9份为蛋清阳性,阳性率24.32%;本实验采用的ELISA方法检测结果在37份标本中,有8份为蛋清阳性,阳性率为21.62%。阳性率比较用SPSS11.0卡方检验(Fishers Exact Test),结果λ2=0.076,P=1.000>0.050,没有统计学差异,即两种方法的检验符合率较高。
⑶未加工组五种蛋清sIgE检测结果:鸡蛋、鸭蛋、鹅蛋、鹌鹑蛋和鸽蛋的阳性率,分别为73.33%、70.00%、53.33%、43.33%、40.00%。鸡蛋和鸭蛋的阳性率值较鹅蛋,鹌鹑蛋和鸽蛋为高。Fishers确切概率法检验结果,χ2=11.123;IgG4检测结果,分别为96.67%、90.00%、93.33%、83.33%、53.33%。鸡蛋和鹅蛋的阳性率值较鸭蛋,鹌鹑蛋和鸽蛋为高。Fishers确切概率法检验结果,χ2=21.941。热加工组sIgE检测结果分别为70.00%、63.33%、46.67%、43.33%、33.33%。鸡蛋的阳性率值仍然最高,鸽蛋最低,各组和未加工组比较阳性率均下降。Fishers确切概率法检验结果,χ2=10.760;IgG4检测结果分别为93.33%、90.00%、83.33%、80.00%、46.67%。鸡蛋和鹅蛋的阳性率值较鸭蛋,鹌鹑蛋和鸽蛋为高。Fishers确切概率法检验结果,χ2=21.544。
结论:
⑴本实验所采用的ELISA方法和Phamacia Unicap检测方法比较,检验符合率较高;
⑵加工对抗原免疫原性有影响,其趋势表现为免疫原性有所降低,但是仍具有激活sIgE和IgG4的生物学活性。五类蛋,检测表现为鸡蛋和鸭蛋过敏原性比鸽蛋要强,但仍需进一步实验证实。对鸡蛋过敏的患儿,应避免食用含蛋类成份的食品。