【摘 要】
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目的:研究Ras/Raf/MEK/ERK通路在结肠癌细胞NDRG1基因表达调控和体外侵袭、迁移中的作用;分析ERK通路、NDRG1基因、肿瘤侵袭及迁移三者间的潜在联系。方法:本实验将Ras/Raf/M
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目的:研究Ras/Raf/MEK/ERK通路在结肠癌细胞NDRG1基因表达调控和体外侵袭、迁移中的作用;分析ERK通路、NDRG1基因、肿瘤侵袭及迁移三者间的潜在联系。方法:本实验将Ras/Raf/MEK/ERK通路的有关抑制剂与HT-29结肠癌细胞共培养,光学显微镜下观察细胞形态学变化;透射电子显微镜观察细胞超微结构变化;24-transwell法检测癌细胞体外侵袭能力和迁移(运动)能力的改变;免疫细胞化学染色、Western Blot检测NDRG1基因表达情况。初步探寻ERK通路对癌细胞形态结构、侵袭迁移能力、NDRG1蛋白表达的影响。结果:与各抑制剂共培养后,HT-29结肠癌细胞活力下降、死亡细胞明显增多;细胞形态变得较规则,细胞及胞核形态、大小趋于一致;细胞排列也变规则,呈单层类似腺样结构。细胞表面微绒毛增多;高尔基复合体、线粒体增多,粗面内质网丰富;胞质内微腺腔常见;出现较明显的功能产物(脂滴、微丝束);有的细胞胞浆空泡化,胞核染色质凝聚、呈团块状边集于核膜处;呈现出细胞分化与凋亡并存。体外实验显示,与对照组相比,加抑制剂各组在铺Matrigel(检测细胞的侵袭性)与不铺Matrigel(检测细胞的迁移性)的实验中,穿过微孔膜的细胞数均减少,差异有统计学意义(P＜0.05)。免疫细胞化学结果显示,HT-29组与DMSO组NDRG1表达较少,加抑制剂各组表达显著增多;Western Blot结果显示,加抑制剂各组均出现NDRG1蛋白表达条带,而HT-29组与DMSO组则未见有NDRG1蛋白的表达。结论:1.阻断Raf/MEK/ERK通路,可诱导HT-29结肠癌细胞发生分化或促进细胞凋亡。2.阻断Raf/MEK/ERK通路,可抑制HT-29结肠癌细胞的体外侵袭、迁移能力。3.阻断Raf/MEK/ERK通路,可明显上调HT-29结肠癌细胞NDRG1蛋白的表达。
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