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背景ROS1基因属于胰岛素受体家族酪氨酸激酶胰岛素受体基因成员之一,在各种肿瘤细胞系中高度表达。ROS1的基因组畸变导致融合蛋白的形成,被认为是有效的致癌驱动因子。克唑替尼是第一个被批准用于NSCLC靶向治疗的ROS1抑制剂。本课题组前期发现的新型螺环取代的氨基吡啶类化合物SMU-B是一种具有良好抗肿瘤活性的c-Met/ALK双重抑制剂,并具有良好的抑制ROS1激酶的活性。目的本文基于课题组前期研究成果,对化合物SMU-B盐酸盐作为ROS1抑制剂的体外生物活性、体内代谢及其抗肿瘤作用进行了初步研究,为其成药性评价提供实验依据。方法1.化合物SMU-B为碱性化合物,为进一步提高它的溶解性和生物利用度,将其制备成盐酸盐。2.采用HTRF技术和MTT法,测定化合物SMU-B对ROS1蛋白激酶的生化活性的抑制效果及体外抗细胞增殖活性。3.采用体外人肝微粒体温孵法研究化合物SMU-B盐酸盐的细胞色素P450酶代谢机理。4.药代动力学实验检测化合物SMU-B盐酸盐在动物体内的生物利用度及药代动力学特征。5.构建高表达ROS1融合蛋白的肺癌异种移植动物模型,对化合物SMU-B盐酸盐体内抗肿瘤作用进行评价。结果1.合成制备了 SMU-B盐酸盐。2.HTRF技术检测化合物SMU-B对ROS1蛋白激酶的抑制效果IC50值为1.16 nM,比 Crizotinib 提高了 4 倍。3.化合物SMU-B对高表达ROS1融合蛋白的CD74-ROS1-A549细胞株有明显的抗细胞增殖活性,IC50值为1.54μM,与Crizotinib效果相当。4.化合物SMU-B盐酸盐在人肝微粒体中代谢生成了 3个产物,包括去甲基产物、脱氢产物和氧化产物,同时,CYP3A4和CYP3A5是主要参与其代谢物形成的主要酶型。5.化合物SMU-B盐酸盐具有较低的毒性,LD50大于1000 mg/kg。在大鼠体内经灌胃给药后,tmax为30 min,Cmax为455.702±6.680μg/L,t1/2为135.701±10.534min,AUC0→为 84907.555±2064.224 μg/L·min。而尾静脉注射给药后,t1/2 为 43.062±4.234 min,AUC0→ 为 30506.340±1177.793 μg/L·min,其口服生物利用度为69.53%。与前期实验结果相比,化合物SMU-B成盐后的生物利用度由原来的47.8%提高到了 69.53%。6.裸鼠荷瘤模型显示化合物SMU-B盐酸盐具有良好的体内抗肿瘤活性。在口服灌胃的给药方式下,低剂量(30mg/kg)给药时,它对裸鼠肿瘤的抑制率为36.38%,在中剂量(50mg/kg)和高剂量(80mg/kg)给药时,它对裸鼠肿瘤抑制率达到了 61.74%和65.38%,而阳性对照Crizotinib给药组(50 mg/kg)的肿瘤抑制率为42.24%。由此可得,SMU-B盐酸盐在30 mg/kg的灌胃剂量下,其对裸鼠移植瘤的抑制作用与阳性对照Crizotinib给药组(50 mg/kg)相当,而在50 mg/kg和80 mg/kg的剂量下,效果明显优于阳性对照组。结论化合物SMU-B具有良好的体外抑制ROS1激酶的生物活性,其盐酸盐在人肝微粒体中的代谢途径主要为去甲基、脱氢和氧化,且参与其代谢的最主要酶是CYP3A4和CYP3A5。化合物SMU-B盐酸盐具有良好的体内抗肿瘤活性,其生物利用度与游离碱形式相比有所提高。本文为其成药性评价提供了实验依据。