论文部分内容阅读
目的以二氯化钴(Cobalt dichloride,CoCl2)作为缺氧剂,体外模拟乳腺癌细胞生长的缺氧(hypoxia)环境,检测miR-210在缺氧条件下在人乳腺癌MCF-7细胞中的表达,并观察缺氧条件对乳腺癌细胞体外侵袭能力的动态影响,探索微小RNA(microRNA)、缺氧环境与乳腺癌(breast cancer)之间的内在联系。方法常规培养人乳腺癌MCF-7细胞株,以CoCl2作为缺氧剂,利用实时荧光定量聚合酶链技术(Realtime polymerase chain reaction,RT-PCR)检测miR-210表达,利用Transwell技术检测细胞的侵袭(invasion)能力。RT-PCR实验分组:缺氧组,常氧对照组。缺氧组MCF-7细胞以终浓度为150umol/L的CoCl2溶液缺氧培养24h,对照组细胞添加等剂量PBS缓冲液常规培养24h。最后RT-PCR检测缺氧组与对照组细胞miR-210的表达水平差异。Transwell实验分组:缺氧组,常氧对照组。其中缺氧组MCF-7细胞分别以终浓度50umol/L、100umol/L、150umol/L、200umol/L的CoCl2溶液处理24h,对照组细胞加等剂量PBS缓冲液常规培养24h。以matrigel基质胶模拟细胞外基质,以上室细胞穿过基底膜数量作为评价指标,观察缺氧环境对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响。实验所得数据进行统计学处理,以P<0.05为有统计学意义。结果1RT-PCR结果显示:不同氧含量环境下,肿瘤细胞中miR-210表达水平存在差异,对照组细胞miR-210呈较低水平表达,经24h处理的缺氧组细胞miR-210的表达水平具有明显的增加,其相对表达量为6.72±1.33,对照组miR-210相对表达量为1.00±0.00,二者差异显著,具有统计学意义(P<0.01)。2Transwell结果显示:缺氧处理24h后观察细胞,随培养环境缺氧程度的增加,缺氧组细胞的穿膜数与空白组相比显著增加,细胞侵袭能力呈增强趋势。穿过人工基底膜的细胞数量分别为168±7.50、276±9.79、320±8.66、516±9.51个/视野。各实验组与对照组细胞穿膜数(65±2.58个/视野)比较,具有显著差异(P<0.01),各实验组细胞穿膜数组内比较,也具有显著差异(P<0.01)。且伴随缺氧剂浓度的升高,细胞的侵袭程度明显增强,各实验组细胞的侵袭能力随缺氧剂的加入量呈正相关性(R=0.978,P=0.000)。结论外周环境的氧含量对乳腺癌细胞MCF-7的miR-210表达具有显著影响:缺氧条件下,miR-210在乳腺癌细胞中的表达显著高于常氧者。乳腺癌细胞的侵袭转移能力随缺氧剂浓度的升高而逐步增强,二者呈现剂量相关性。