苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis）是目前应用最为广泛的一类杀虫细菌，也是一种具有较高应用潜力的细菌表面展示系统的宿主菌。本研究利用一种推断的苏云金芽胞杆菌自溶素蛋白mbG作为运载蛋白，成功构建了该菌营养生长期细胞的表面展示系统，进一步优化分析了运载蛋白mbG的展示性能，并用于展示几种具有不同功能和性质的外源蛋白，可为进一步发展苏云金芽胞杆菌多功能工程菌提供研究基础。　　 分析已测序的苏云金芽胞杆菌菌株的基因组序列，显示含有多种推断的细胞壁锚定相关蛋白，具有用作构建表面展示体系的运载蛋白的可能性。据此设计PCR扩增引物，从苏云金芽胞杆菌野生型菌株YBT-1520基因组中克隆到3个与细胞壁锚定相关蛋白的编码基因，分别命名为mbA、mbG和mbP。采用流式细胞技术对其编码蛋白的表面展示性能进行了比较，结果显示在自身启动子的控制下，mbG具有最大的表面展示效率，为47.5％。对其氨基酸结构分析表明，mbG并没有明显的分泌信号肽序列和跨膜信号序列，表现出一定的特异性。因此，本研究选取mbG作为研究的主要对象。　　 进一步的结构预测分析表明mbG为一种推断的内切-β-N乙酰葡萄糖胺酶，由两个结构域组成，即由两个串联重复的LysM单元组成的具有细胞壁锚定活性的N端结构域，和具有催化活性的C端结构域。采用绿色荧光蛋白（GFP）作为标签蛋白构建融合表达体系。Western blot分析、流式细胞仪分析、蛋白酶降解实验、SDS敏感性实验、免疫荧光显微镜观察和免疫电镜观察证实了mbG-GFP在表面的定位，同时表明该融合蛋白表达和展示效率较低。　　 克隆了不依赖芽胞的cry3Aα的启动子替换mbG本身启动子，提高了表达和表面展示能力。分别克隆了mbG的不同结构单元，N端结构域、C端结构域、LysM1和LysM2，考察它们的细胞壁结合能力。mbG的N端结构域为细胞壁结合的功能单元，LysM1是主要的锚定单元。进一步研究表明，2个N端重复的锚定单元具有最大的表面展示能力，而3个N端重复的锚定单元的表面展示能力下降，表明融合蛋白的大小是限制转运的关键因素。　　 从痢疾志贺氏菌（Shigella dysenteriae）W202中克隆了一个推断的漆酶基因wlac，并且在大肠杆菌（Escherichia coli）中实现了可溶性的大量融合表达。纯化的漆酶Wlac是一个与大肠杆菌CueO相似的漆酶，分子量为55 kDa，以ABTS为底物测定Wlac的最大酶活为24.4 U/mg（Km=0.086），最佳pH值为2.5。在0℃到25℃内稳定，大于40℃时活性迅速下降。Wlac能被200 mmol的EDTA完全抑制，32 mmol的SDS、50 mmol的NaN3和60 mmol的三氯乙酸部分抑制。加入Cu2+使得酶活增加，而其它的金属离子仅具有微弱或者负效应。通过用Phe106替换Glu106得到了突变的漆酶WlacS，删除一个从Leu 351到Gly 378的α-螺旋得到WlacD，活性分别是Wlac的2.2倍（52.9 U/mg）和3.5倍（85.1 U/mg），另外，WlacD还具有较高的热稳定性。同时还发现，与内含肽融合的漆酶能够大约维持纯酶活性的80％。　　 以具最有运载性能的2个mbG的N端重复结构单元为锚定模体（anchoring motif），将突变的漆酶’WlacD成功的表面展示到苏云金芽胞杆菌受体菌BMB171细胞表面。通过用纯化的漆酶制备抗血清，Western blot分析证实了WlacD的表面定位，全细胞酶活测定显示工程菌的酶活达到15.3 U/mL，该工程菌有望应用于污水处理等领域。　　 另外，采用逐步升温和加入低剂量的SDS的方法消除了苏云金芽胞杆菌YBT-1520的部分内生质粒，得到突变株YBT-1520e。YBT-1520e仍然具有产生伴胞晶体的能力，且转化效率增加，转化实验表明，外源质粒在YBT-1520e的稳定性为100％。