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作为小鼠定向造血（definitive hematopoiesis）的起始，造血干细胞（hemato-poietic stem cells，HSC）的产生在胚胎发育时期一直广为关注。Medvinsky等人证实第一个HSC产生于胚胎期10.5天（E10.5）小鼠胚内的主动脉-性腺-中肾区（aorta-gonad-mesonephros region，AGM区）。与此同时，HSC也被发现存在于E10.5的胚胎的头部、脐动脉与卵黄动脉。至E11.0-E11.5时，HSC也在血管丰富的卵黄囊（yolk sac，YS）、胎盘（placenta，PL）和胎肝(fetal liver，FL)中出现，E12.0后FL成为HSC的主要扩增位点。E17.0时HSC开始转移至骨髓（bone marrow，BM）并大量增殖。可见HSC的发育在胚胎的多个位点进行，且自我更新活跃。探索HSC起源的精确位点一直以来都是其发育学研究的难点之一，这是由于在第一个功能型HSC被发现的同时，胚胎循环系统已经建立，因而无法得知HSC是否产生于单一且独立的原发位点。而且，至今尚未发现有任何单一标志能特异性富集胚胎期的HSC。这也使寻找其精确的原发位点变得异常困难。本研究的第一部分，主要考察了Flk-1分子在胚胎期10.5天（E10.5）的AGM区不同类型造血前体细胞的表达情况。流式细胞学分析发现低于10%的Flk-1~+细胞与CD41、CD45/Ter119有共表达。继而分选出CD31~+CD45-Ter119-Flk-1~+CD41~+（R1，代表不成熟的造血前体细胞）和CD31~+CD45-Ter119-Flk-1~+CD41-（R2，代表内皮细胞）两群细胞，利用造血集落培养和OP9共培养体系分别考察其体外的髓系与淋系潜能。结果表明：仅R1组细胞能在造血集落培养体系中形成典型的造血集落；但与OP9共培养7-9天后，两组细胞均能产生丰富的造血前体细胞（CD45~+c-Kit~+）、髓系细胞（Gr-1~+/Mac-1~+）、红细胞（Ter119~+）和B淋巴细胞（CD19~+）。上述结果表明：E10.5的小鼠胚胎AGM区，Flk-1仍然在幼稚的造血前体细胞以及更早期的生血内皮细胞表达。但是，此时的造血干细胞前体和造血干细胞是否表达Flk-1仍需通过体内功能实验明确。本研究的第二部分，主要考察了CD47分子在E10.0-E12.5相关造血位点不同类型造血细胞的表达情况。流式分析显示：E10.5AGM/YS/循环血、E11.5AGM/YS/PL和E12.5循环血中的活细胞中分别有1.0%/13.3%/2.1%、1.4%/13.4%/13.6%和0.9%的细胞表达CD47。流式分选出E10.0AGM/卵黄囊/循环血中的CD47~+与CD47-两群细胞后，应用体外的CFU-C实验检测两群细胞的体外髓系潜能，培养7-9天后发现E10.0AGM/YS/循环血中仅CD47~+细胞群能产生典型的造血集落（CFU-C）。说明在CFU-C培养体系中，仅CD47~+群中含有髓系祖细胞。随后我们利用流式细胞术分选出E10.5AGM区内的c-Kit~+CD47~+（R1）与c-Kit~+CD47-（R2）两群细胞，利用OP9共培养体系检测上述两群细胞的体外造血潜能，培养7-9天发现两群均能在OP9共培养体系下形成一定比例的CD45~+c-Kit~+细胞（造血细胞）、Ter119~+细胞（红细胞）、Gr-1~+/Mac-1~+细胞（髓系祖细胞）、B220~+细胞（B淋巴细胞或前体），这表明：在OP9共培养体系下，E10.5AGM区内CD47~+细胞与CD47-细胞均具有一定的造血潜能。为明确HSC表面是否表达CD47，我们同样利用流式细胞术将E11.5AGM区、卵黄囊和胎盘的细胞分选为c-Kit~+CD47~+（R1）与c-Kit~+CD47-（R2）两群细胞。随后的移植实验结果显示仅R1群能产生造血重建。这表明E11.5AGM、卵黄囊和胎盘中的HSC均表达CD47，从而进一步证实CD47能富集此时AGM区、卵黄囊和胎盘中所有的HSC。有趣的是，当我们将E12.5循环血中的R1群分选至c-Kit~+CD47high与c-Kit~+CD47low群之后，造血重建却全部发生在c-Kit~+CD47low群中，表明此时循环血中所有的HSC集中在CD47low群。