背景：大剂量化疗联合自体造血干细胞移植治疗晚期乳腺癌于80年代报道后，各报道的结果令人鼓舞，而这一技术的关键在于造血干细胞的动员、采集、分离、冻存及回输和回输后的复性。为了使大剂量化疗联合自体造血干细胞移植治疗晚期乳腺癌这一课题能够获得成功，有必要对外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测作一研究。 目的 研究外周血造血干细胞的采集、分离、冻存及干细胞活性的检测。 方法 我们用脐血干细胞作为研究对象。用封闭式动脉采血法采集10例脐血，经Ficoll法分离，取白细胞层重悬于10ml RPMI 1640培养液中作为样本，对样本作单核细胞计数（MNC），胎盼兰拒染试验及流式细胞仪CD34+细胞计数。将样本分装在18个冷冻管内，分成3组，分别用10％DMSO、自配的5％DMSO+6％HES+4％人体白蛋白及CP-1三种不同的的冷冻保存液冻存于-196℃的液氮和-80℃的低温冰箱中，冷冻时间为1个月、3个月和6个月。对冷冻后的样本进行MNC计数。胎盼兰拒染试验及流式细胞仪CD34+细胞计数。取5例未冷冻的样本稀释成细胞数＜10~6/ml，进行流式细胞仪计数。所得结果作统计学分析。 结果：1、经封闭式动脉采血法采集的血量平均数为72.2±17.3ml，分离后单核细胞计数平均为6.19±1.67×10~7，分离后胎盼兰拒染试验为100％，显示细胞活性良好。 2、三种不同冷冻保存液对造血干细胞的保存效果在1月、3月、6月后无显著性差异（P＞0.05）。冷冻保存1月、3月、6月后对造血干细胞的影响无显著性差异（P＞0.05）。说明我们自配的冷冻保存液完全能够替代进口产品。DMSO的浓度为5％时与10％时对造血干细胞的冷冻保存的影响无显著性差异（P＞0.05），自配冷冻保存液减一少了DMSO的用量，减小了于细胞回输后DMSO的毒性作用。 3、当细胞数（1“时，流式细胞仪计数明显低下（I，①．01）。因此，在流式细胞仪检测的样本中细胞数应八0’。 4、随着冷冻时问的延长；特别是6月后，流式细胞议对CD3卜细胞检测的相对数逐渐增高。这是由于在冷冻和融解过程中死亡的细胞多数是已分化的颗粒细胞和单核细胞，幼稚细胞较少。因此在检测过程中CD34～胞百分数随冷冻时间的延长有增高趋势。 5、在6个月内，－80’删氏温冰箱中的冻存与入96”C液氮内的冻存相比，对造血于细胞的影响无显著性差异（K0．05）。因此，在临床应用上，短期内对造血于细胞的冻存完全可以在－8（j0氏温冰箱内进行。 结论：我们认为自配的冷冻保存液效果良好，完全可以适应我们的临床应用，且其对造血于细胞的保护作用可与国外产品媲美，回输后的毒付作用小。短期造血于细胞的冻存可以在－80’删低温冰箱内进行，对细胞活性影响小。流式细胞仪对CD34“细胞的检测，应注意细胞数，不能＜10’个。冷冻保存造血于细胞1、3、6个月后对细胞的活性影响不大，但在6个月后流式细胞仪CD34E胞计数有增高的趋势。