李离体繁殖及再生体系的建立

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本文以中国李品种大石早生李(Prunus salicina Lindl.’Oshiwase’)、小黄李(Prunussalicina Lindl.’Xiaohuangli’)和欧洲李品种大玫瑰(Prunus domestica L.’Grand Rose’)为试材,建立了稳定高效的李离体快繁技术体系,并在此基础上,研究了不同因子对小黄李再生不定芽的影响,以期建立高效的李再生技术体系,为李遗传转化研究和创新种质资源奠定基础。主要结果如下:1.以中国李品种大石早生李为试材,通过外植体消毒试验,结果表明4-5月为最佳取材时期,此时外植体正处于春季萌发生长阶段,带菌较少,成活率高,易诱导成苗。此时期外植体采用70%酒精30s+(O.5%NaClO+吐温-20 2-3滴)12min消毒效果较好。其较适合的继代增殖培养基配方为:F14+0.6-0.8 mg·L-1 6-BA+0.1-0.2mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,增殖倍数达6.0;较适合生根的培养基为:1/2Ms+0.2 mg·L-1NAA+0.1 mg·L-1IBA,生根率66.7%;驯化基质:蛭石:珍珠岩:泥炭(1:1:1),成活率皆在65%以上。2.以小黄李的单芽茎段为外植体进行离体培养,研究不同培养基,植物生长调节剂的种类及其浓度、pH值对小黄李增殖与生根的影响。结果表明:较合适的增殖培养基为F14+0.8 mg·L-1 6-BA+0.2 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,pH值5.4-5.8之间;较合适的生根培养基为1/2MS+0.1 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,生根率达100%,单株平均根数3-4根,且植株生长健壮;以蛭石:珍珠岩:泥炭(1:1:1)移栽生根苗,成活率80%以上,为工厂化育苗生产奠定了基础。3.以欧洲李品种大玫瑰为试材,筛选出其较适合的继代增殖培养基配方:1/2MS+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1 GA3+30 g·L-1蔗糖+6 g·L-1琼脂,增殖倍数达6.5;较适合生根的培养基:1/2MS+0.2 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1IBA,生根率达79.8%。4.以中国李品种小黄李为试材,研究不同基本培养基种类,植物生长调节剂的种类及浓度、暗处理时间对其不定芽再生率的影响。试验结果表明:叶片、普通茎段、白化茎段三种外植体的最适合再生的基本培养基均为WPM培养基,最佳浓度配比为WPM+1.5 mg·L-16-BA+0.8 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+6.0 g·L-1琼脂;6-BA的诱导叶片再生效果优于TDZ,其再生的最佳暗处理时间为21d。5.三种外植体中,叶片再生率最高,达66.35%,但再生芽苗不能存活,主要表现为褐化致死,且不同抗氧化剂处理改善褐化现象不明显;其次为白化茎段,普通茎段最差,最高再生频率分别为30.42%、18.57%。但以白化茎段为外植体的再生芽苗生长正常,存活率100%;着生于白化茎段顶端第1、2节位的节间为适宜再生的外植体。
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