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研究背景：动脉粥样硬化(AS)是一种涉及免疫和炎症反应的复杂的慢性炎性疾病。MicroRNA-146(miR-146)是第一个被发现在免疫系统中具有调节作用的microRNA (miRNA),包括miR-146a和miR-146b两种形式。近年研究表明,miR-146a在AS斑块中高度表达,表明miR-146a和AS密切相关。TOLL样受体4(TLR4)是一种介导天然免疫反应的跨膜信号转导受体,通过激活核因子-κB (NF-κB)启动炎症反应,参与了AS的形成、进展以及斑块破裂的各个环节,可通过多途径影响AS进程。普罗布考和瑞舒伐他汀是治疗AS的常用药物。近年研究表明,二者除调脂作用外,还具有其它独立于调脂外的多效性作用。但miR-146a在AS炎症TLR4/NF-KB信号通路中的调控作用及普罗布考／瑞舒伐他汀对于miR-146a的影响还不清楚。目的：探讨miR-146a是否通过其靶基因TNF受体相关因子6(TRAF6)调控AS中TLR4/NF-κB信号通路,以及普罗布考／瑞舒伐他汀是否通过调控niR-146a,通过免疫炎症调节起到抗AS作用。方法：一、体外培养人急性单核细胞白血病细胞(human acute monocytic leukemia cell,人THP-1单核细胞),给予脂多糖(LPS)(1μg/ml)刺激构建细胞炎症损伤模型,分为6组：(1)对照组：不加任何干预因素；(2)模型组：LPS;(3)miR-146a mimic组：转染miR-146a mimic+LPS;(4) miR-146a inhibitor组：转染miR-146a inhibitor+LPS;(5) miR-146a mimic阴性对照组：转染miR-146a mimic阴性对照+LPS;(6) miR-146a inhibitor阴性对照组：转染miR-146a inhibitor阴性对照+LPS。应用RT-PCR法测定miR-146a、 TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、 TRAF6、 NF-κB mRNA表达,Western blot法测定TRAF6, NF-κB蛋白表达,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-a (TNF-a)水平。二、体外培养人THP-1单核细胞,给予LPS (1μg/ml)刺激,并给予药物干预,分为5组：(1)对照组：无水乙醇+二甲基亚枫(DMSO);(2)模型组：LPS+无水乙醇+DMSO;(3)普罗布考组：LPS+无水乙醇+DMSO+普罗布考；(4)瑞舒伐他汀组：LPS+无水乙醇+DMSO+瑞舒伐他汀；(5)联合组：LPS+无水乙醇+DMSO+普罗布考+瑞舒伐他汀。应用RT-PCR法测定miR-146a、TLR4、MyD88、 TRAF6、 NF-κB mRNA表达,Western blot法测定TRAF6、NF-κB蛋白表达,ELISA检测细胞上清液IL-6、 TNF-α水平。三、高脂饲料喂养载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠,构建AS模型,分为5组：(1)对照组：野生型C57BL/6J小鼠,普通饮食；(2)模型组：ApoE-/-小鼠,高脂饮食；(3)普罗布考组：模型组基础上给予普罗布考饲料；(4)瑞舒伐他汀组：模型组基础上给予瑞舒伐他汀灌胃；(5)联合组：模型组基础上给予普罗布考饲料+瑞舒伐他汀灌胃。喂养12周后,心脏穿刺取血检测血脂及载脂蛋白水平,处死小鼠后取主动脉标本,RT-PCR法检测AS斑块miR-146a、TLR4TRAF6、 NF-κBmRNA表达,Western blot法检测AS斑块TRAF6、 NF-kB蛋白含量。结果：一、LPS刺激人THP-1单核细胞后,模型组和对照组相比,miR-146a的表达,TLR4mRNA及TRAF6、 NF-kB蛋白均显著升高(P<0.05),MyD88、 TRAF6、 NF-KBmRNA有增高趋势(P>0.05),细胞上清液IL-6、 TNF-α、水平均显著升高(P<0.05)；和模型组相比,miR-146a mimic组miR-146a的表达显著升高(P<0.01),TRAF6mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.05), TLR4、 MyD88、NF-kB mRNA和NF-kB蛋白显著升高(P<0.01)；和模型组相比,miR-146a inhibitor组miR-146a的表达显著下降(P<0.01),TRAF6mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.01), TLR4mRNA和NF-kB蛋白表达显著下降(P<0.05),NF-kB、 MyD88mRNA呈下降趋势(P>0.05)。 miR-146a mimic和miR-146a mimic阴性对照组相比,miR-146a表达升高约1145倍,miR-146a inhibitor和miR-146a inhibitor阴性对照组相比,miR-146a表达下降约5倍。二、LPS刺激人THP-1单核细胞后,模型组和对照组相比,miR-146a的表达,TLR4、 MyD88、 TRAF6、 NF-KBmRNA及TRAF6、 NF-kB蛋白均显著升高(P<0.01),细胞上清液IL-6、 TNF-α水平均显著升高(P<0.01)；和模型组相比,普罗布考组miR-146a的表达、NF-kB mRNA、 TRAF6蛋白均显著下降(P<0.05), TLR4MyD88TRAF6mRNA和细胞上清液TNF-α水平有下降趋势(P>0.05),细胞上清液IL-6水平显著下降(P<0.05)；和模型组相比,瑞舒伐他汀组：miR-146a的表达、TLR4mRNA、 TRAF6mRNA和蛋白、NF-kB mRNA和蛋白均显著下降(P<0.05),MyD88mRNA有下降趋势(P>0.05),细胞上清液IL-6、 TNF-a水平均显著下降(P<0.05)；和模型组相比,联合组miR-146a的表达、TLR4、 MyD88、 TRAF6、 NF-kB mRNA及TRAF6、 NF-kB蛋白均显著下降(P<0.05),细胞上清液IL-6、TNF-α水平均显著下降(P<0.01)。三、8周龄ApoE-/-小鼠高脂饮食喂养12周可以建立成功的AS模型,普罗布考、瑞舒伐他汀单药或联合治疗可以有效的调节ApoE-/-小鼠血脂水平,减少主动脉AS斑块面积。模型组和对照组相比,miR-146a的表达,TLR4、 TRAF6、 NF-κB mRNA及TRAF6、 NF-κB蛋白均显著升高(P<0.01)；和模型组相比,普罗布考组miR-146a的表达、TLR4、 TRAF6. NF-κB mRNA和NF-κB蛋白均显著下降(P<0.05), TRAF6蛋白有下降趋势,但无统计学意义：和模型组相比,瑞舒伐他汀组miR-146a的表达、TLR4及NF-κB mRNA、 TRAF6和NF-κB蛋白均显著下降(P<0.05),TRAF6mRNA有下降趋势,但无统计学意义；和模型组相比,联合组miR-146a的表达、TLR4.TRAF6、NF-κB mRNA及TRAF6、 NF-κB蛋白均显著下降(P<0.05)。结论：1. LPS (1μg/ml)刺激体外培养人THP-1单核细胞24小时可以建立成功的免疫炎症损伤细胞模型。LPS刺激体外培养人THP-1单核细胞可以导致miR-146a表达升高,TLR4/NF-KB信号增强。2. miR-146a能够抑制靶基因TRAF6, miR-146a除TRAF6外,可能还存在另外一个未知靶基因,对TLR4/NF-KB通路起抑制作用,miR-146a可能通过对TRAF6和未知靶基因的共同调节来调控TLR4/NF-KB炎症信号通路。4.普罗布考联合瑞舒伐他汀能够抑制LPS诱导人THP-1单核细胞miR-146a及TLR4/NF-κB信号的转导,从而减轻炎症因子IL-6和TNF-a的释放起到抗AS的作用。5.8周龄ApoE-/-小鼠高脂饮食喂养12周可以建立成功的AS模型,ApoE-/小鼠AS斑块中miR-146a表达增加。6. ApoE-/-小鼠经普罗布考／瑞舒伐他汀治疗12周后,TC、 LDL水平显著下降,普罗布考联合瑞舒伐他汀通过降低miR-146a、阻滞TLR4/NF-κB信号起到抗AS的免疫炎症作用。