本课题围绕姜黄素胃肠难吸收,生物利用度低的突出问题进行实验研究。采用离体大鼠翻转肠囊法、在体大鼠肠灌流法、Caco-2细胞模型试探性研究姜黄素的肠吸收机制。并在此基础上,通过针灸干预大鼠的胃肠穴位,探讨针灸对姜黄素肠吸收的影响。也为提高某些胃肠难吸收药物的生物利用度提供新的思路。　　 本研究主要包括以下内容:　　 1.观察姜黄素在大鼠肠道中的稳定性和肠壁物理吸附等,为肠吸收机制实验的展开提供条件依据。采用HPLC法检测姜黄素在2h内各时间点的剩余浓度,并采用紫外分光光度法检测姜黄素的肠壁物理吸附率。实验结果显示:姜黄素在2h内各时间点的剩余浓度与0h相比无显著性差异(p＞0.05),姜黄素的C2h/C0h(物理吸附率)均大于98％。姜黄素在正常体温空白肠液中的稳定性好。大鼠肠壁组织对药物没有明显的非特异性物理吸附。结论:空白肠溶液可以保持姜黄素的稳定状态,外界环境对姜黄素的影响较小,可以进行姜黄素肠吸收机制的实验。　　 2.通过观察维拉帕米对姜黄素的肠吸收速率和表观渗透系数的影响,探讨姜黄素肠吸收机制。采用大鼠在体肠灌流法观察姜黄素在回肠段的吸收速率分数(Ka)和表观渗透系数(Papp)的变化。实验结果显示:当姜黄素由低浓度增加到高浓度时,其吸收速率(Ka)和表观渗透系数(Papp)都呈下降趋势。由此可见,姜黄素在实验浓度条件下,回肠段的吸收并非简单性质的被动扩散,呈现饱和性的主动转运特征。浓度5μg/mL姜黄素合用维拉帕米时,其Ka值和Papp值都有所增加。结论:可能是维拉帕米竞争性拮抗P-gp。减弱了P-gp在回肠中对姜黄素的外排作用,增加了姜黄素的吸收。　　 3.采用离体大鼠翻转肠囊法观察维拉帕米对姜黄素肠吸收转运量(Q)的变化,探讨姜黄素肠吸收机制。实验结果显示:浓度为5、10、20μg/ml时的姜黄素溶液的单位面积累积转运量分别为0.35±0.04μg/cm2、0.32±0.08g/cm2、0.25±0.0μg/ml。随着姜黄素浓度的升高,在回肠段的转运量反而下降,有主动转运的特征存在。在浓度为5μg/ml的姜黄素肠液中加入维拉帕米,单位面积累积转运量为0.41±0.07μg/ml。结论:对P-gp的抑制可减弱其对姜黄素的外排作用,从而增加了姜黄素的转运量。　　 4.通过建立Caco-2细胞模型进一步研究P-gp在姜黄素肠吸收过程中的作用。本实验通过测定表观渗透系数Papp和外排率ER等指标,观察姜黄素在Caco-2细胞模型上转运规律。实验结果显示:随着姜黄素的浓度升高,ER值逐渐升高,具有浓度依赖性;实验结果:10μg/ml及20μg/ml的ER值都大于1。外排比较明显。加入500μM维拉帕米时,10μg/ml及20μg/mlPappA→B比单用姜黄素时有所增加,跨细胞膜电阻并无显著性的降低;可能是维拉帕米抑制了P-gp的外排作用。由本实验可知姜黄素的肠吸收机制极有可能和P-gp相关。　　 5.研究“足三里”针刺穴位处方对姜黄素肠吸收的作用及其回肠P-gp表达的影响。方法:建立单用姜黄素(混悬液)、维拉帕米结合姜黄素和三种常用“足三里”针刺处方组大鼠针灸干预实验。采用HPLC法检测2h内不同时间点血药浓度的变化,及免疫组化方法观察各组大鼠回肠段P-gp的表达的影响。实验结果初步显示维拉帕米结合姜黄素用药、针刺“足三里”穴位处方组都可以提高各时间姜黄素的血药浓度值。维拉帕米结合姜黄素给药组和“足三里”针刺处方各组姜黄素在大鼠胃肠道的吸收均优于姜黄素单独用药组。免疫组化结果显示:单用姜黄素给药组的P-gp平均光密度值表达比姜黄素结合维拉帕米给药组、针刺“足三里”不同处方各组都要大,并显示差异性。结论:P-gp对姜黄素的吸收有影响。针刺“足三里”不同处方可能起到类似维拉帕米抑制P-gp外排,抑制其在肠道的表达,促进姜黄素的肠吸收。