[目的]　　本课题旨在探讨差异表达的MicroRNA-1915(miR-1915)对人结肠癌奥沙利铂(L-OHP)耐药细胞HCT116/L-OHP凋亡作用的影响。通过分子克隆的方法构建BCL-2的3′UTR区双荧光素酶报告基因质粒，转染HCT116/L-OHP耐药细胞，检测细胞内hsa-miR-1915的表达，进一步验证hsa-miR-1915在结肠癌耐药细胞凋亡通路中的可能作用机制。观察中药复方肠胃清含药血清对miR-1915/BCL-2凋亡通路的影响，阐明中药复方肠胃清逆转人结肠癌奥沙利铂耐药的分子机制，探索microRNA与肿瘤耐药的相关机制，为指导临床应用中医药增加肿瘤细胞化疗敏感性的作用机制提供了新的研究思路和实验依据。　　[方法]　　1.体外培养人结肠癌奥沙利铂敏感细胞HCT116、耐药细胞株HCT116/L-OHP，采用MTT法检测耐药指数(RF)。采用Q-RT-PCR检测两个细胞株miR-1915表达的差异。　　2.合成hsa-miR-1915模拟物、转染HCT116/L-OHP细胞，采用原子吸收光谱法检测细胞内铂及铂-DNA结合量、流式细胞术观察miR-1915对耐药细胞凋亡的影响，Westernblot研究miR-1915对凋亡蛋白Bcl-2、P53、Caspase3及铂类耐药蛋白ERCC1、AnnexinA3的调控作用。　　3.建立结肠癌裸鼠皮下移植瘤，FOLFOX化疗方案(L-OHP/5-Fu)、肠胃清粗提物干预治疗21天，检测各组裸鼠抑瘤率，采用免疫组织化学法观察肿瘤组织中Bcl-2、AnnexinA3蛋白的表达情况。　　4.提取肠胃清含药血清，采用MTT法检测肠胃清的逆转指数(RI)，采用彗星实验法检测肠胃清联合化疗组对耐药细胞DNA损伤的影响，流式细胞术观察肠胃清联合化疗组对耐药细胞凋亡的影响。　　5.Q-RT-PCR验证miR-1915对靶基因BCL-2mRNA表达的调控、观察肠胃清对miR-1915表达的影响。构建BCL-2基因3UTR双荧光素酶报告基因质粒，转染细胞，观察各实验组对HCT116/L-OHP细胞荧光素酶活性的影响。　　[结果]　　1.人结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞株的稳定性良好，耐药指数(RF)为8.35倍。miR-1915在HCT116/L-OHP耐药细胞株呈低表达(P<0.05)。　　2.miR-1915模拟物协同L-OHP增加耐药细胞内铂含量(P<0.05)，铂-DNA加合物(P<0.05)，促进耐药细胞的凋亡(P<0.05)。BCL-2、AnnexinA3蛋白在耐药细胞呈高表达(P<0.05，P<0.001)，miR-1915模拟物可显著降低BCL-2的蛋白表达量(P<0.001)，升高P53、Caspase3的蛋白表达量(P<0.001，P<0.05)。　　3.FOLFOX化疗联合中药高剂量组的抑瘤率效果最显著(P<0.01)，BCL-2、AnnexinA3在耐药肿瘤组织高表达(P<0.05，P<0.01)，化疗联合中药高剂量组BCL-2、AnnexinA3蛋白表达降低(P<0.05，P<0.01)。　　4.肠胃清含药血清可以逆转人结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞对L-OHP的耐药性，逆转指数(RI)为2.63倍。肠胃清联合L-OHP组能促进耐药细胞发生DNA损伤(P<0.001)，及凋亡的发生(P<0.01)。　　5.miR-1915模拟物能够降低BCL-2mRNA的表达(P<0.05)。miR-1915模拟物组、肠胃清联合miR-1915模拟物组细胞荧光素酶活性均显著降低(P<0.01，P<0.01)。　　[结论]　　1.miR-1915的低表达可能是人结肠癌奥沙利铂耐药的关键机制。　　2.miR-1915通过增加肿瘤细胞中铂类的聚集，促进肿瘤细胞凋亡发挥逆转耐药的作用，其机制与降低BCL-2、升高P53、Caspase3蛋白的表达有关。　　3.肠胃清能协同L-OHP抑制肿瘤生长，其机制与降低耐药肿瘤组织中BCL-2、AnnexinA3蛋白表达有关。　　4.肠胃清可逆转人结肠癌HCT116/L-OHP耐药细胞对L-OHP的耐药性，其机制与其协同L-OHP促进耐药细胞发生DNA损伤、诱导凋亡的发生相关。　　5.推测miR-1915/BCL-2凋亡途径可能是肠胃清逆转人结肠癌奥沙利铂耐药性机制之一。