志贺菌是引起细菌性痢疾的病原体,后者在我国于1985年归为乙类传染病。随着生活水平的提高和管理的加强,其发病率不断下降,但仍远高于发达国家。其致病的强弱、耐药性等与毒力基因有关。毒力基因的检测已作为痢疾常规监测项目之一,对它的研究众多,但多集中在单一PCR,费时费力。分型方法研究众多,但对各种分型方法的比较甚少,尚没有标准的分子生物学分型方法。鉴于此,本实验拟建立一种同时检测志贺菌主要几种毒力基因(setl、sen、ipaH、ial、stxl、virA)的多重PCR;比较几种常用的分型方法,找出一种更适合志贺菌检测的分子生物学方法,为建立标准的检测方法提供建议。方法本实验选取河南省2001～2007年各痢疾监测点分离到的1株痢疾志贺菌、114株福氏志贺菌、11株宋内志贺菌作为研究对象,进行毒力基因的多重PCR建立和检测,并进行重复外回文序列PCR、随机PCR、质粒图谱分型及细菌全基因组脉冲场凝胶电泳,比较它们在溯源和分型应用中的优劣,并对脉冲场凝胶电泳的结果进行聚类分析。结果多重PCR同时检测与单基因PCR分别检测6种毒力基因两种方法具有相近的灵敏度与特异性。毒力基因sen、ipaH、stxl、ial、virA和setlB的阳性率分别为88.70%、99.13%、0、88.70%、92.17%和85.22%,共10种型别。重复外回文序列PCR阳性率96.57%,扩增出0～10条,大小在100～2000bp之间的条带,共三个型别。随机PCR可以很好地对志贺菌进行分型,但很不稳定。质粒图谱分型众多、每次分型效果均很好,但可重复性不太高。脉冲场凝胶电泳将116株志贺菌分为86种不同的带型,可重复性较高。结论对可疑志贺菌临床标本首选多重PCR,对于爆发和聚集性病例首选脉冲场凝胶电泳技术。