该研究试图建立大鼠睾丸支持细胞体外培养模型,研究DDT的主要代谢产物p,p-DDE对支持细胞几种重要功能基因表达的影响,探讨p,p-DDE对支持细胞的基因组效应,进而研究p,p-DDE导致生精障碍的可能作用机制.第一部分 大鼠睾丸支持细胞离体培养方法及p,p-DDE的毒性作用 建立大鼠睾丸支持细胞体外原代培养模型,18-20日龄SD大鼠睾丸经胰蛋白酶和胶原酶依次消化,分离和纯化支持细胞.在5％CO2,35℃条件下进行培养,并经富尔根染色进行支持细胞鉴定.第二部分P,P,-DDE对支持细胞转铁蛋白和雄激素结合蛋白基因表达的影响为p,p-DDE对支持细胞基因转铁蛋白和雄激素结合蛋白基因转录的影响,该研究对离体原代培养的大鼠支持细胞给予不同剂量(DMSO为对照,p,p-DDE剂量分别为10、30、50μmol/L)的p,p-DDE染毒24h,提取细胞内总RNA,以β-actin为内对照,用一步法RT-PCR检测支持细胞内转铁蛋白和雄激素结合蛋白mRNA水平.结果表明p,p-DDE可导致支持细胞的基因表达异常,转铁蛋白的表达明显降低可能是导致生精过程障碍的重要机制,而支持细胞细胞也可能产生一定的保护性适应,如促进雄激素结合蛋白的表达以结合更多的雄激素来维持生精过程.综上所述,该研究结果表明:1.建立的支持细胞离体原代培养方法是可行的;2.p,p-DDE对支持细胞的最大无细胞毒性作用剂量为50μmol/L;3.p,p-DDE可以抑制支持细胞转铁蛋白基因的转录表达;4.支持细胞p,p-DDE的作用下可以高表达雄激素结合蛋白;4.p,p-DDE对支持细胞的基因组效应是比较复杂的,这种复杂的基因组效应与其抗雄激素作用有关.尽管该研究取得了一些初步成果,但还有待进一步的深入研究,如:1.p,p-DDE对支持细胞的一些重要功能基因表达包括转录、翻译多个环节的影响;2.不同表达的功能基因之间的相互作用及其调控机制;3.FSH(卵泡刺激素)、T(睾酮)等激素在p,p-DDE致支持细胞基因异常表达中的作用及其途径等.