枯草芽孢杆菌FJ-08抑制有害疣孢霉(M.perniciosa)活性物质分析和发酵条件的优化

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随着化学防治的危害日益显著,生物防治越来越受到人们的重视。过去几十年利用芽孢杆菌防治植病取得了丰硕的成果。本论文研究的枯草芽孢杆菌FJ-08对多种病害真菌均有一定抑制作用,尤其对有害疣孢霉(M. perniciosa)有很强的抑制。疣孢霉是双孢蘑菇疣孢霉害的病原,对双孢蘑菇的危害极大,严重影响了双孢蘑菇的产量。本文试探利用枯草芽孢杆菌FJ-08防治双孢蘑菇疣孢霉病,做了一些基础性的探究:  1,通过正交实验设计,改用抗疣孢霉活性作指标,单因素筛选碳源、氮源、无机盐,最后用正交优化得到了新的培养基组合:玉米粉1%、鱼粉蛋白胨2%、硫酸铵0.25%,磷酸氢二钠1%,比使用LB培养基对疣孢霉抗菌率提高了29%之多,这将有利于枯草芽孢杆菌FJ-08更好的应用的疣孢霉的防治上。  2,酸提取法提取枯草芽孢杆菌FJ-08发酵液活性物质,得到粗提物并研究了其基本性质。我们发现粗提物对pH,蛋白酶不敏感,但在热处理后,抗疣孢霉活性有所减弱。发酵液和粗提物均有纤维素酶活性,但灭火后活性丧失。粗提物对牡丹葡萄孢、绿色木霉、轮斑菌、香蕉枯萎病天蓝一号、龙眼拟茎点霉、龙眼焦腐病菌、墨汁鬼伞均有很强的抑制作用,对疣孢霉的抑制作用最强。  3,发酵液粗提物高效液相分析发现,粗提物中含有表面活性素同系物中的7类、伊枯草素A同系物中的3类。从而确定了枯草芽孢杆菌FJ-08粗提物中含有表面活性素和伊枯草素。两个标准品对峙疣孢霉试验中发现抑制的效果并不明显,这说明二者的在抑制疣孢霉中不起决定性作用,可能是另有其他物质,或者是多种物质协同作用。  4,通过PCR扩增得到了编码surfactin基因和iturin基因的克隆,并对编码surfactin基因进行了克隆测序,得到的序列在NCBI上比对发现与莫海威芽孢杆菌GS1、枯草芽孢杆菌YcKJ的sfp基因(编码surfactin基因)相似度达到99%。
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