CCI大鼠前扣带皮层NR2B受体对突触蛋白PSD-95与Homer1b/c表达的调控作用

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目的:  通过观察抑制前扣带皮层NR2B受体对CCI大鼠突触蛋白PSD-95与Homer1b/c表达影响,探讨NR2B受体在神经病理性疼痛的作用及其可能机制。  方法:  第一部分:观察CCI模型大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)的变化。8只大鼠随机分为2组(n=4):Sham组(假手术组)、CCI组(CCI模型组),CCI组行左侧坐骨神经结扎,Sham组仅暴露左侧坐骨神经但不结扎。分别测定CCI建立前、建立后1d、2d、3d、5d、7d后MWT和TWL值。  第二部分:观察CCI大鼠前扣带皮层(ACC) NR2B受体、突触蛋白PSD-95和Homer1b/c表达量的变化。8只大鼠随机分为2组(n=4):Sham组、CCI组,在CCI模型建立后7d,采用Western blotting法分别检测大鼠CCI结扎侧(同侧)与对侧ACC区域NR2B受体、突触蛋白PSD-95和Homer1b/c表达量的变化。  第三部分:观察CCI大鼠ACC小胶质细胞、星形胶质细胞活化情况及NR2B受体的定位情况。8只大鼠随机分为2组(n=4):Sham组、CCI组,在CCI模型建立后7d,采用免疫荧光方法分别检测大鼠同侧与对侧ACC小胶质细胞、星形胶质细胞的活化情况及NR2B受体在小胶质细胞、星形胶质细胞、神经元的表达与定位。  第四部分:观察CCI大鼠ACC微量注射NR2B受体抑制剂Ro25-6981对神经病理性疼痛的影响。16只大鼠随机分为4组(n=4):Sham组、CCI组、DMSO组、Ro组。DMSO组、Ro组大鼠CCI后第5d、6d、7d ACC分别注入DMSO(0.5μL/侧)或Ro25-6981[0.5μL(2.5μg/μL)/侧]。每组大鼠在术前1d、术后3d、术后第5d、6d、7d给药2h后测定MWT和TWL值。  第五部分:观察CCI大鼠ACC注射Ro25-6981后突触蛋白PSD-95、Homer1-b/c表达量的影响。16只大鼠随机分为4组(n=4):Sham组、CCI组、DMSO组、Ro组。DMSO组、Ro组大鼠CCI后第5d、6d、7d ACC分别注入DMSO(0.5μL/侧)或Ro25-6981[0.5μL(2.5μg/μL)/侧],第7d注药后2h取材ACC,Westem blotting法检测ACC区域突触蛋白PSD-95、Homer1b/c的表达量。采用免疫共沉淀法(Co-Ip)检测Homer1b/c与NR2B及PSD-95的相互作用。  结果:  1.与Sham组大鼠相比,CCI组1d、2d、3d、5d、7d MWT和TWL值均明显降低,有统计学意义(P<0.01)。  2.CCI模型建立后7d,大鼠ACC同侧与对侧NR2B受体,突触蛋白PSD-95、Homer1 b/c表达量均明显增加,与Sham组大鼠相比,有统计学意义(P<0.05)。  3.CCI模型建立后7d,大鼠ACC同侧与对侧小胶质细胞、星形胶质细胞活化数量明显增加,与Sham组大鼠相比,有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光共染发现NR2B受体仅定位于神经元上。  4.大鼠CCI后第5d、6d、7d连续双侧ACC微量注射NR2B受体抑制剂Ro25-6981后可明显提高大鼠MWT和TWL。与CCI组和DMSO组相比,有统计学意义(P<0.01)。  5.大鼠双侧ACC微量注射Ro25-6981可显著下调ACC突触蛋白PSD-95表达量,与CCI组和DMSO组相比,有统计学意义(P<0.01)。而对Homer1 b/c表达量无明显影响,与CCI组和DMSO组相比,无统计学意义(P>0.05)。Co-Ip结果显示Homer1b/c与NR2B及PSD-95的相互作用减少。  结论:  ACC微量注射NR2B受体抑制剂Ro25-6981可缓解CCI大鼠机械和热痛觉过敏,可能与Ro25-6981在拮抗了NR2B受体作用的同时下调了突触蛋白PSD-95的表达及突触蛋白相互作用有关。
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