【摘 要】
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背景与目的:龋病是全人类最普遍的疾病之一,自从病因学研究证实龋病为一种细菌感染性疾病以来,研究人员就有关龋病相关微生物及免疫学方面的课题做了大量的研究,以期找到龋病
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背景与目的:龋病是全人类最普遍的疾病之一,自从病因学研究证实龋病为一种细菌感染性疾病以来,研究人员就有关龋病相关微生物及免疫学方面的课题做了大量的研究,以期找到龋病的主要病原菌及可用抗原成分,从而研制出防龋疫苗以从微生物环节阻止龋病的发生.在前期研究中本文已经成功地构建出含有免疫刺激序列CpG基序的抗SBRDNA疫苗pcDNA3.1-SBR,为进一步研究此防龋疫苗的防龋效果以及比较此抗SBR DNA疫苗和变形链球菌SBR亚单位疫苗的免疫效果,在本文中我们拟通过PCR、T-A克隆等技术构建原核表达质粒pTriEx-4-SBR,在大肠杆菌中表达并纯化可作为亚单位疫苗的变形链球菌融合蛋白SBR;通过动物实验探讨变形链球菌SBR作为亚单位防龋疫苗的免疫原性,评价经涎腺接种诱导有效免疫应答的可行性,探讨在涎腺免疫接种后局部免疫调节相关细胞因子变化状况.第一部分:变形链球菌唾液结合区段(SBR)原核表达载体构建及亚单位疫苗SBR制备结论:1.利用PCR、T-A克隆等分子生物学技术可成功地将编码SBR的DNA片段克隆到表达载体pTriEx-4,构建出原核表达载体pTriEx-4-SBR;2.在JM109(DE3)中诱导表达出C端含有6个组氨酸标签的SBR融合蛋白,并纯化得到可用作防龋重组抗原亚单位疫苗的SBR融合蛋白.第二部分:变形链球菌唾液结合区段(SBR)经腺周免疫小鼠后机体抗体应答及局部神经生长因子和白介素5表达结论:1.本实验所表达及纯化的变形链球菌SBR亚单位疫苗经颌下腺接种途径可诱导明显的抗体应答;2.变形链球菌SBR亚单位疫苗在颌下腺作局部免疫接种,不但可诱导抗体应答,还可促进免疫调节相关细胞因子的表达,参与免疫应答调节网络以及促进涎腺分泌功能.
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