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目的：
证明卵巢癌细胞中粘附分子CD147及Lewisy抗原的结构关系,探讨Lewisy抗原对细胞CD147分子表达及其介导的粘附能力的影响。
方法：
1、利用Real-time PCR方法检测CD147 mRNA在RMG-I-hFUT和RMG-I细胞中的表达。利用免疫细胞化学方法检测两种卵巢癌细胞系中CD147的表达;采用Western Blot方法检测Lewisy抗体及PI3K通路特异性抑制剂LY294002处理前后两种细胞系中CD147的表达;免疫共沉淀及激光共聚焦方法检测Lewisy抗原与CD147的结构关系,并利用免疫共沉淀方法检测CD147各亚型在胞膜及胞浆的定位;检测抗Lewisy抗体及抗CD147抗体处理前后RMG-I-hFUT及RMG-I细胞在层粘连蛋白和Ⅳ型胶原上粘附铺展能力的变化。
2、为证实CD147在卵巢癌细胞中表达的普遍性,我们同时用免疫细胞化学、Real-time PCR、Western Blot及免疫共沉淀方法检测了六种卵巢癌细胞中(RMG-I-hFUTRMG-I、H08910PMH08910、COC1DDPCOC1)CD147 mRNA、CD147蛋白及其上Lewisy表达。
结果：
1、免疫细胞化学和Western Blot结果均显示RMG-I-hFUT细胞中CD147的表达明显高于RMG-I细胞(P均＜0.05)。抗Lewisy抗体及LY294002预先处理RMG-I-hFUT和RMG-I细胞后,CD147表达均明显下降(P均＜0.05)。Lewisy抗原能与CD147分子发生免疫共沉淀,RMG-I-hFUT细胞的CDl47分子中Lewisy的含量约为RMG-I细胞的2.12倍(P＜0.05)。Real-time PCR结果显示CD147mRNA在RMG-I-hFUT略中有降低(P＞0.05)。RMG-I-hFUT细胞在层粘连蛋白和Ⅳ型胶原上的粘附能力均强于RMG-I细胞(P均＜0.05),这种粘附能力的增强可被抗Lewisy抗体抑制。
2、免疫细胞化学及Western blot结果均显示细胞系RMG-I-hFUT、卵巢癌细胞高转移株HO8910PM及耐药株COC1DDP中CD147蛋白表达较其亲本细胞均明显升高(P均＜0.05);H08910PM细胞及COC1DDP细胞中CD147 mRNA表达分别为其亲本细胞的约1.61倍和3.52倍(P均＜0.05),而RMG-I-hFUT细胞中CD147基因表达降为亲本的62％(P＞0.05)。免疫沉淀结果显示六种细胞的CD147分子都与Lewisy抗原共表达。
结论：
1、CD147分子寡糖链中具有Lewisy结构,Lewisy抗原表达增加增进细胞系RMG-I-hFUT中CD147分子的表达,Lewisy抗原在CD147介导的卵巢癌细胞粘附中起到重要作用。
2、六种卵巢癌细胞RMG-I-hFUTRMG-I、HO8910PM＼HO8910、COC1DDP＼COC1中CD147分子及其上Lewisy抗原随着转移、耐药程度的增加而表达增强。