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肾小管间质纤维化(tubular interstitial fibrosis,TIF)是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾衰竭的共同病变过程,其特征性病理改变为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积。大量的实验证实转化生长因子-β1(Tansforming Growth Factor-β1,TGF-β1)是诱导间质纤维化的重要细胞因子。肾素血管紧张素(RAS)系统通过直接或间接的作用激活TGF-β1,诱导纤维化的发生;同时激活的TGF-β1进一步刺激RAS的活化。有效抑制TGF-β1以及RAS反应对控制肾小管间质纤维化的发生发展有着重要意义。
目的:本研究采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)的方法建立肾小管间质纤维化模型,以缬沙坦为对照药,通过观察解毒活血法对大鼠肾脏组织病理形态学的改变,对血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肾素活性(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平、转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)的影响,探讨其对UUO大鼠的保护作用及可能机制,为临床治疗提供实验依据。
方法:健康雌性Sprague Dawley(SD)大鼠50只,随机分为假手术组,模型组,缬沙坦组,解毒活血低剂量组,解毒活血高剂量组,每组10只,适应性喂养1周。第8天,除假手术组,其余各组结扎左侧输尿管复制UUO模型。所有大鼠灌胃给药,缬沙坦组给予26mg生药/kg·d1.解毒活血低剂量组予12g生药/kg·d;解毒活血高剂量组予24g生药/kg·d,容量均为1ml/100g,假手术组和模型组予等容量生理盐水,每日1次,共14天。所有大鼠于第22天断头处死,常规制备血清,检测血肌酐和血尿素氮。行}玎巳、Masson染色,观察肾组织病理形态学改变;用放射免疫法检测血及组织中的PRA、AngⅡ;免疫组化法对组织中TGF-β1蛋白的表达进行定位及半定量分析。
结果:
1.各组大鼠的一般情况
假手术组大鼠一般情况良好,精神、饮食、尿量、活动等未见明显异常。模型组精神萎靡、毛发枯黄,饮食减少,一般状况差。各治疗组精神、饮食等明显改善。
2.各组大鼠血肌酐、血尿素氮的检测结果
与空白组相比,模型组大鼠的血肌酐、血尿素氮显著升高(P＜0.01),缬沙坦组、解毒活血高、低剂量组的血肌酐、血尿素氮,较模型组均明显降低(P＜0.01)。各治疗组间无明显差异。
3.各组大鼠的肾组织病理形态学改变
HE染色显示:假手术组的肾小管上皮细胞排列整齐,无明显异常改变。模型组的肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落,肾小管扩张,间质大量炎症细胞浸润。缬沙坦组,解毒活血高、低剂量组的肾小管上皮细胞变性、坏死及炎症细胞浸润程度均比模型组减轻。
Masson染色显示:假手术组的间质有少量胶原成分表达。模型组间质可见大量胶原沉积。缬沙坦组,解毒活血高、低剂量组的胶原沉积均比模型组显著减少。
4.各组大鼠血清及肾组织中AngⅡ的放射免疫检测结果
与假手术组比较,模型组大鼠血清及肾组织中AngⅡ水平明显升高(P＜0.05)。与模型组相比,各治疗组大鼠血清及肾组织中AngⅡ水平下降有显著性差异(P＜0.05)。各治疗组间无明显差异。
5.各组大鼠血清及肾组织中PRA的放射免疫检测结果
与假手术组比较,模型组大鼠血清及肾组织中PRA水平明显升高(P＜0.05)。与模型组相比,各治疗组大鼠血清及肾组织中PRA水平下降有显著性差异(P＜0.05)。各治疗组间无明显差异。
6.各组大鼠肾组织TGF-β1的免疫组化检测结果
结果显示:模型组呈强阳性表达,TGF-β1主要沉积于肾小球系膜区、肾小管上皮细胞及间质。各治疗组TGF-β1表达较模型组明显减弱。各治疗组间无明显差异。
结论:
1.解毒活血方药可以降低血肌酐、尿素氮,减轻肾功能损伤。
2.解毒活血方药具有显著减轻肾小管间质纤维化,改善肾脏病理损伤,保护肾脏的作用。
3.解毒活血方药能够降低血清及组织中PRA、AngⅡ的水平,阻断RAS系统,保护肾功能,延缓肾间质纤维化进展。
4.解毒活血方药可抑制肾组织中TGF-β1的表达,从而减少细胞外基质沉积,延缓肾间质纤维化进程。