犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬细小病毒(CPV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV-2)是引起犬常见传染病的主要病原体,给养犬业带来了严重经济损失。本研究根据四种病毒在GenBank中登录的序列,设计四条引物和四条TaqMan探针,通过优化反应条件以及敏感性、特异性和重复性试验,建立四种病毒单重TaqMan实时荧光定量PCR方法以及四重TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明,四种病毒单重方法对CAV-Ⅱ、CPV、CPIV最小检出量均为101copies/μL,CDV最小检出量为102-101copies/μL,敏感性高;标准曲线线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.990;四种病毒只在本病毒阳性模板有扩增信号,特异性强。CPV和CAV-Ⅱ两种病毒组内和组间变异系数均小于2%,CPIV和CDV两种病毒组内和组间变异系数均小于3%,重复性良好。检测了 72份样品结果均能特异性检测出四种病毒。四重方法的敏感性,CAV-Ⅱ和CDV可以达到102copies/μL,CPV和CPIV可以达到103 copies/μL,敏感性较高;标准曲线线性关系良好,相关系数(R2)均大于0.990。不同病毒之间无交叉反应且仅有阳性模板有扩增信号,特异性强。四种病毒组内和组间变异系数均小于5%,重复性良好。检测了 26份样品,同时与普通PCR方法进行复核结果一致。表明所建立的四重TaqMan荧光定量PCR检测方法具有快速、敏感、稳定等优点,可以用于四种病毒的定量检测。