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目的: 本研究通过建立人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)在人单核白血病细胞（THP-1细胞）潜伏及激活的细胞感染模型，应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)、染色质免疫共沉淀(ChromatinImmnuoprecipitation，ChIP)、免疫印迹(Western blot)和发夹状RNA(shRNA)干扰等技术，分析HCMV潜伏及激活感染后转录因子GA TA-1与GATA-2的表达及其与HCMV LUNA及UL126a基因转录的关系，明确GATA-1与GATA-2对HCMV LUNA及UL126a基因的转录调节作用，为阐明HCMV潜伏及激活感染的分子机制提供实验依据。 方法: 1.HCMV潜伏与激活感染模型的建立 利用HCMV AD169株感染THP-1细胞(1×106/ml，MOI=3)，37C、5％CO2的条件下培养，分别于24h、48h、72h和96h收集细胞，提取总DNA、总RNA与蛋白。Real-time PCR检测细胞内HCMV DNA拷贝数;RT-PCR检测HCMV IE1(UL123)和UL83 mRNA的表达。 采用佛波酯(PMA，100 ng/μl)刺激HCMV潜伏感染THP-1细胞分化为巨噬细胞，分别于24h、48h、72h和96h搜集细胞，提取总DNA、总RNA与蛋白。实时荧光定量PCR检测细胞内HCMV DNA拷贝数;RT-PCR检测HCMV IE1(UL123)和UL83 mRNA的表达。综合判断HCMV在THP-1细胞中的感染状态。2.转录因子GATA-1与GATA-2对HCMV LUNA与UL126a基因的转录调控作用 Western blot检测HCMV潜伏及激活感染THP-1细胞24h、48h、72h和96h后转录因子GATA-1与GATA-2的表达;ChIP分析转录因子GATA-1与GATA-2与HCMV LUNA及UL126a基因5'上游启动子区域的结合情况;RT-PCR检测HCMV LUNA及UL126a基因的表达。 3.shRNA干扰对HCMV LUNA及UL126a基因转录的调控 利用具有靶向干扰作用的shRNA分别敲低THP-1细胞中转录因子GATA-1与GATA-2的表达后，分别检测HCMV潜伏与激活感染THP-1细胞LUNA及UL126a基因的表达。 结果: 1.建立HCMV潜伏与激活感染细胞模型 HCMVAD169株感染THP-1细胞后，细胞内HCMV DNA载量基本不变;HCMV IE1 mRNA在感染后24h开始表达，其表达随着感染时间增加而降低，UL83 mRNA未见表达。提示建立了HCMV潜伏感染的细胞模型。 PMA（终浓度为100 ng/μl）刺激HCMV潜伏感染的THP-1细胞分化后，细胞内HCMV DNA载量随着感染时间增加而升高;HCMV IE1 mRNA在感染后24h开始表达，其表达随着感染时间增加而升高;UL83 mRNA在PMA刺激后第96h开始表达。提示建立了HCMV激活感染的细胞模型。 2.转录因子GATA-1与GATA-2参与HCMV LUNA与UL126a基因的转录调控作用 HCMV潜伏及激活感染THP-1细胞96h后，Western blot检测显示，HCMV潜伏感染时GATA-1与GATA-2的表达量高于激活感染;ChIP分析结果显示，HCMV潜伏感染时GATA-1及GATA-2与LUNA及UL126a基因5'启动子区域的结合率均低于激活感染。 3.shRNA干扰对HCMV LUNA及UL126a基因转录调控的影响 靶向GATA-1与GATA-2的shRNA转染THP-1细胞96h后，Western blot检测结果显示，GATA-1与GATA-2的表达均明显降低，结果具有统计学意义;RT-PCR检测结果显示，HCMV LUNA与UL126a基因的表达均出现明显的下降;且干扰后HCMV潜伏感染时LUNA与UL126a基因的表达明显低于激活感染。 结论: 本研究成功建立了HCMV潜伏与激活感染的THP-1细胞模型;转录因子GATA-1与GATA-2在HCMV潜伏及激活感染时与LUNA及UL126a基因5'上游启动子区域存在结合，并影响了LUNA和UL126a基因的表达;初步阐明了转录因子GATA-1及GATA-2通过调控LUNA和UL126a基因的表达影响HCMV感染状态。