【摘 要】
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全文由两部分组成.第一部分,在乳酸乳球菌中建立偏嗜密码子编码的apidaecin融合表达体系,该实验室已经以泛素（ubiquitin）融合蛋白的形式在乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）中表达
【出 处】
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中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部
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全文由两部分组成.第一部分,在乳酸乳球菌中建立偏嗜密码子编码的apidaecin融合表达体系,该实验室已经以泛素（ubiquitin）融合蛋白的形式在乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）中表达了apidaecin.表达产物的产量可占宿主菌可溶性蛋白的7.2﹪.为了进一步提高产量,达到工业化生产的要求,该研究根据乳酸乳球菌的密码子偏嗜性,对原来的apidaecin基因进行了改造.同时,我们还对诱导时间,诱导物浓度和培养基的成分对泛素和apidacin融合蛋白表达量的影响进行了研究.第二部分,克隆泛素特异性蛋白酶（YUH1）的基因.YHU1是来源于酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的一种泛素特异性蛋白酶.它可以特异性的水解泛素C-末端最后一个甘氨酸与除脯氨酸之外的任何一个氨基酸形成的肽键.ubiquitin-apidaecin融合蛋白不具备抗菌活性.为了能够去除泛素,得到有活性的apidaecin,该研究从酵母中克隆了YUH1基因,并且,计划在大肠杆菌（E.coli）BL21中进行表达.从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中提取基因组DNA后,以它为模板进行PCR扩增,获得一段711-bp的编码泛素特异性蛋白酶的DNA片段.我们已经成功的克隆到了YUH1基因.下一步,可以继续在大肠杆菌（E.coli）BL21中构建表达体系.
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