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MicroRNAs(miRNAs)是一类能够对基因进行广泛调节的非编码微小RNA,存在于真核生物体内。已有研究表明它们能够参与肿瘤形成、心脏发育、脂肪代谢、神经系统发育和细胞的增殖分化等过程。此外有证据表明miRNA会影响毛囊的发育和生长周期。本课题组前期利用Solexa测序检测了藏绵羊毛囊发育不同时期(休止期、生长期和衰退期)miRNAs的表达情况,试图筛选出对毛囊发育过程有重要作用的miRNAs。测序结果表明毛囊从休止期到生长期的发育过程中,miR-148b和miR-320属于上调表达倍数最高的一类miRNAs。为了进一步验证上述miRNA在毛囊发育过程中的具体作用及作用机制,本实验以人毛乳头细胞和人毛母质细胞为材料,在体外研究了miR-148b和miR-320对其增殖情况的影响,推断了miR-148b和miR-320在毛囊发育过程中的作用以及它们发挥作用可能涉及的信号通路。获得结果如下：(1)Q-PCR的结果说明毛囊生长期miR-148b和miR-320的表达水平显著高于休止期的表达情况,这与前期的测序结果相符。(2)miR-148b可促进人毛乳头细胞和人毛母质细胞的增殖,miR-320对人毛乳头细胞和人毛母质细胞的增殖有抑制作用。用miRNA minicis转染人毛乳头细胞和人毛母质细胞后发现,超表达miR-148b后利用Edu检测的增殖细胞比例显著高于.对照组的(P<0.05)；而超表达miR-320后Edu检测的增殖细胞比例显著低于对照组的(P<0.05)。另用xCELLigence系统实时监控系统检测证实超表达miR-148b后人毛乳头细胞的增殖速度显著高于对照组。(3)miR-148b能显著提高Wnt信号通路的活性。TOPFlash/FOPFlash荧光素酶报告基因检测结果表明miR-148b能显著提高TOPFlash报告基因的荧光信号强度(P<0.05)。(4)超表达miR-148b能提高Wnt信号通路下游转录因子的表达水平,而miR-320会降低它们的表达水平。在人毛乳头细胞中超表达miR-148b和miR-320后检测β-catenin、cycD、c-jun和PPARD的mRNA的表达水平,结果表明相比于对照组,转染miR-148b minics能提高上述基因的表达情况,而转染miR-320minics则会降低上述基因的表达情况。(5) miR-148b可能会靶作用于SMAD2、CAMK2A、NFAT5和Wnt10b来发挥对Wnt信号通路的调控作用。我们利用Targetscan对miR-148b的靶基因进行了预测和筛选,选取NFAT5、SMAD2、CAMK2A、PRICKL2、Wnt1和Wnt10B作为其候选靶基因；经过双荧光素酶报告基因载体系统验证,证实了miR-148b与SMAD2、 CAMK2A、NFAT5和Wnt10b3’UTR的特异结合作用。