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背景p11是S100多基因家族中的一员,又称S100A10(S100钙结合蛋白A10),因其分子量在11KD左右,故称其为p11,在机体中广泛分布在大脑、心脏、胃肠道、肾脏、肝脏、肺和脾脏等部位。研究表明,p11作为Annexin A2的辅助蛋白和Actin蛋白一起参与了细胞蛋白的转运、胞膜的内化、内体和多囊体的形成等过程,Annexin A2作为一种自噬调控基因,它可以调控自噬体的形成。敲除Annexin A2,饥饿将无法诱导自噬。近年来的研究发现p11对大脑神经-精神区域中的诸多生理病理过程起着调节作用,特别是p11的缺失促进了抑郁的产生,目前已经被学术界公认。p11可能参与了神经细胞的自噬并且对神经系统和精神疾病进行一系列的调控影响。可是当前,关于p11是如何在神经细胞自噬过程中发挥作用及其详细的分子机制还需要进一步研究。目的通过体外实验,研究p11沉默后对神经细胞自噬功能的影响,解析其相关的分子机制。方法用DMEM高糖完全培养基培养人神经母细胞瘤细胞(SH-sy5y细胞),使用24孔板进行细胞铺板,将Control-Si RNA质粒和p11-Si RNA质粒通过瞬时转染至SH-sy5y细胞内,其中,一组用DMEM完全培养液培养至48h,另一组用0%血清DMEM不完全培养液饥饿处理24h。然后,用1×Tricine-SDS蛋白上样缓冲液提取细胞的总蛋白,用Trizol法提取总RNA。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳检测p11、LC3、Atg5、p62、Beclin-1等蛋白表达情况。实时荧光定量PCR检测p11 mRNA、mTOR、Bcl-2等RNA的指标。应用Quantity one灰度分析软件和Graph Pad Prism5软件,采用单因素方差分析和t检验进行数据的处理和分析。结果1.Western Blot结果显示p11-SiRNA质粒在SH-sy5y细胞中成功表达。2.p11沉默后,LC3Ⅱ水平降低,Atg5无显著变化,p62水平升高,Beclin-1磷酸化水平降低,Beclin-1非磷酸化水平无显著差别,抑制细胞自噬。3.p11沉默后下调饥饿诱导的细胞LC3Ⅱ水平,抑制细胞自噬。4.实时荧光定量PCR结果显示p11沉默后,p11 mRNA水平显著降低,mTOR升高,Bcl-2、JNK、PI3K表达水平均下降。结论1.p11沉默显著抑制细胞自噬。2.p11沉默抑制饥饿诱导的细胞自噬。3.p11影响细胞自噬的功能可能与PI3K-AKT-mTOR信号通路及Beclin-1磷酸化相关。