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目的:评价“四君子汤”、“四君子加川牛膝方”及川牛膝对下肢难愈性创面的治疗效果;探讨其促进下肢创面愈合的机制及特点;初步探讨川牛膝引经作用的机制。 方法:建立96只大鼠下肢难愈性创面模型，随机分为四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组及生理盐水组。观察创面面积、创面愈合率及创面愈合时间;在创面愈合过程中（造模后的第7天、第14天），取创面新生肉芽组织及血液，应用免疫组化、图像分析等技术，观察成纤维细胞的S期细胞比例、P38MAPK、CDK4、cyclinD1、PDGF、bFGF以及TGF-β1的水平变化，从细胞周期角度探讨四君子汤、四君子加川牛膝方、川牛膝促进创面愈合的作用机制和特点。 结果:(1)创面面积:造模第1天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，创面面积比较无明显差异(F=2.91，P＞0.05)。造模后第3、7、10、14天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组创面面积均小于生理盐水组（F值分别为109.30，2969.95，1020.64，1692.83; P＜0.01）;四君子加川牛膝方组创面面积均小于四君子汤组(F值分别为109.30，2969.95，1020.64，1692.83;P＜0.01)。 (2)创面愈合率:造模后第7、10、14天，四君子汤组创面愈合率明显高于生理盐水组，差异均有统计学意义(F值分别为1489.59，913.82，1564.41; P＜0.05);造模后第3、7、10、14天，四君子加川牛膝方组创面愈合率明显高于生理盐水组，差异均有统计学意义（F值分别为61.39，1489.59，913.82，1564.41; P＜0.01，P＜0.05）;造模后第10、14天，四君子加川牛膝方组创面的愈合率高于四君子汤组(F值分别为913.82,1564.41; P＜0.05)。 (3)创面愈合时间:四君子汤组、四君子加川牛膝方组均可明显缩短创面愈合时间，与生理盐水组比较差异均具有统计学意义(F=25.02; P＜0.05，P＜0.01);而四君子加川牛膝方组创面愈合时间明显少于四君子汤组(F=25.02; P＜0.05)。 (4)肉芽组织HE染色结果:造模后第7天，创面肉芽组织HE染色，生理盐水组血管生成较少，成纤维细胞较少;四君子加川牛膝方组，血管生成中度，成纤维细胞中度;四君子汤组，成纤维细胞较多;川牛膝组，成纤维细胞较大，新生血管较少。造模后第14天，创面肉芽组织HE染色，生理盐水组新生血管中度，成纤维细胞中度;四君子加川牛膝方组，成纤维细胞中度，新生血管较多;四君子汤组，新生血管中度，成纤维细胞中度;川牛膝组，新生血管较多。 (5) bFGF:造模后第7天，四君子汤组及四君子加川牛膝方组bFGF浓度明显高于生理盐水组(F=4.09，P＜0.05);川牛膝方组与生理盐水组无明显差异(P＞0.05);四君子汤组、四君子加川牛膝方组无明显差异(P＞0.05)。造模后第14天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=0.26，P＞0.05)。 (6) TGF-β1:造模后第7d，四君子汤组及四君子加川牛膝方组TGF-β1浓度明显高于生理盐水组(F=9.64，P＜0.05);川牛膝方组与生理盐水组无明显差异(P＞0.05);四君子汤组、四君子加川牛膝方组无明显差异(P＞0.05)。造模后第14d，TGF-β1浓度表达，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=0.12，P＞0.05)。 (7) PDGF:在造模后第7d，四君子汤组、四君子加川牛膝方组PDGF的表达明显高于生理盐水组(F=4.30，P＜0.05);川牛膝组PDGF与生理盐水组无明显差异(P＞0.05);四君子加川牛膝方组与四君子汤组PDGF无明显差异(P＞0.05)。在造模后第14d，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较，PDGF表达水平无明显差异(F=0.85，P＞0.05)。 (8) P38MAPK:造模后第7天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组P38MAPK的表达明显高于生理盐水组(F=9.82，P＜0.01);川牛膝组与生理盐水组无明显差异(P＞0.05);四君子加川牛膝方组与四君子汤组无明显差异(P＞0.05)。造模后第14天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=2.01，P＞0.05)。 (9) CyclinD1:造模后第7天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=1.33，P＞0.05);造模后第14天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=3.65，P＞0.05)。 (10) CDK4:造模后第7天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=1.94，P＞0.05);造模后第14天，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝组、生理盐水组，组间比较无明显差异(F=1.48，P＞0.05)。 (11)成纤维细胞S期细胞比例:在造模后第7天，对成纤维细胞G0/G1期细胞比例的表达，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组均明显低于生理盐水组(F=25.50;P＜0.01，P＜0.05)，四君子加川牛膝方组明显低于四君子汤组(F=25.50;P＜0.05)。对成纤维细胞G2/M期细胞比例的表达，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组与生理盐水组均无显著性差异(F=1.33; P＞0.05)。对成纤维细胞S期细胞比例的表达，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组均明显高于生理盐水组(F=386.14;P＜0.01)，四君子加川牛膝方组明显高于四君子汤组(F=386.14;P＜0.05，P＜0.01)。在造模后第14天，对成纤维细胞G0/G1期及G2/M细胞比例的表达，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组与生理盐水组均无显著性差异（F分别为0.27和3.44;P＞0.05）。对成纤维细胞S期细胞比例的表达，四君子加川牛膝方组明显高于生理盐水组(F=386.14; P＜0.01)，亦明显高于四君子汤组(F=386.14; P＜0.01)。 (12) MTT:造模后第7天，对Fb增殖活性，四君子汤组、四君子加川牛膝方组、川牛膝方组明显高于生理盐水组(F=39.09，P＜0.01，P＜0.05)，四君子汤组、四君子加川牛膝方组组间无明显差异(P＞0.05)。造模后第14天，对Fb增殖活性，四君子加川牛膝方组明显高于生理盐水组，亦高于四君子汤组(F=11.49，P＜0.05)，川牛膝方组与生理盐水组比较无明显差异(P＞0.05)。 结论:(1)补虚生肌类中药四君子汤及四君子加川牛膝方，均可加速创面愈合;四君子加川牛膝方效果优于四君子汤。 (2)补虚生肌类中药四君子汤及四君子加川牛膝方，通过上调TGF-β1、PDGF、bFGF等细胞因子的合成和分泌，共同调控P38MAPK-cyclinD1/CDK4信号转导通路，加速成纤维细胞由G0/G1期进入S期，促进成纤维细胞的增殖，促进创面肉芽组织增生，填充组织缺损，从而促进创面愈合。 (3)川牛膝引经作用的机制可能是通过提高成纤维细胞S期细胞比例，促进成纤维增殖而发挥的协同作用。