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目的：MicroRNAs是一类长约20-24nt的单链非编码RNA，在转录后水平负性调控靶基因的稳定性和表达效率[1]。MicroRNAs的异常表达与肿瘤的发生密切相关[231，很可能是一类潜在的癌基因[4,5]或抑癌基因[6]。MiR-21被认定为是一种癌基因，参与肿瘤发生的多个进程[78,96,97,98,99]。近来的研究显示miR-125b在多种肿瘤中充当抑癌基因的功能[88,89,90,91]。但miR-21及miR-125b对于乳腺癌细胞株动物成瘤实验研究还未见报道。本实验利用裸鼠皮下成瘤实验证明它们在乳腺癌细胞中的功能。MircoRNAs能通过调控靶基因影响肿瘤的生长[7]。本实验根据已筛选出的miR-21及miR-125b靶基因进行研究，HBP1、eIF4A2、RSK1、ETV6这四个靶基因表达水平与患者预后的关系尚未见报道。我们应用免疫组织化学方法检测miR-21及miR-125b预测靶基因的蛋白表达水平与乳腺癌患者预后的关系。另外，还应有用细胞体外实验方法进一步了解ETV6在乳腺癌中的功能。这些靶基因的研究为发现新的乳腺癌预后指标及进一步研究miRNA在乳腺癌发病机制中的作用打下基础。
方法：乳腺癌细胞株MCF-7分别转染PNA-antimiR21及PNA-Control，MDA-MB-435细胞株分别转染Pre-miRNA125b及Pre-Control，BALB/c雌性裸鼠皮下成瘤，观察两组间成瘤速度、肿瘤大小的差别。本实验组已经应用基因芯片和预测软件得到miR-21预测靶基因HBP1、eIF4A2、RAB6A、PACE4、PITX2及miR-125b预测靶基因ETS1、ETV6、RSK1、MNK2、UBE2E3、ASB13。搜集214例1999年至2004年中山大学肿瘤防治中心存档的石蜡包埋浸润性乳腺癌组织，制作成组织芯片，所有病例都有完整的临床病理资料及5年以上的随访资料，术前均未接受放化疗，病理诊断均为浸润性乳腺癌。免疫组织化学EnVision二步法进行蛋白表达染色。Kaplan-Meier方法和Cox回归分析统计蛋白表达水平与乳腺癌预后的关系。ROC曲线看靶基因对患者预后的预测效果。乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3分别转染ETV6-siRNA和Control-siRNA后进行ETV6蛋白Weston-blotting检测了解其转染效果，转染后进行细胞增殖、凋亡、克隆形成及细胞周期实验，了解ETV6在乳腺癌细胞中的功能。
结果：裸鼠成瘤实验显示Pre-miRNA125b及Pre-Control两组间肿瘤体积及瘤重有明显差别(P＜0.05)，miR-125b具有明显抑制MDA-MB-435细胞株皮下成瘤的能力；MCF-7组转染PNA-antimiR-21后肿瘤体积、重量均比PNA-Control组的大，但统计学上无差异(P＞0.05)。Kaplan-Meier方法Log-Rank分析结果显示miR-21预测靶基因HBP1、eIF4A2不同蛋白表达水平的术后5年生存率有显著差别(P＜0.05)；miR-125b预测靶基因ETS1、ETV6、RSK1不同蛋白表达水平的术后5年生存率有显著差别(P＜0.05)。Cox多重回归分析表明HBP1、 ETS1、ETV6及RSK1分别是乳腺癌独立预后指标之一(P＜0.05)。ROC曲线结果提示相对与临床常用的诊断指标，HBP1、ETS1、ETV6、RSK1对乳腺癌患者的预测效果更好。Weston-blotting检测ETV6-siRNA和Control-siRNA转染MCF-7、SK-BR-3细胞株成功，后进行增殖、凋亡、克隆形成及细胞周期实验，证明ETV6有促进细胞生长增殖和抑制凋亡的能力，但不是通过细胞周期调控其功能。
结论：⑴裸鼠成瘤实验显示miR-125b能够抑制乳腺癌细胞皮下成瘤能力，说明乳腺癌中miR-125b具有抑癌基因的功能。MiR-21在乳腺癌细胞裸鼠皮下成瘤实验中的结果跟已有研究结果符合。⑵MiR-21预测靶基因的5年生存率的结果表明HBP1、eIF4A2可能作为乳腺癌预后的新指标。⑶MiR-125b预测靶基因的5年生存率结果表明ETS1、ETV6、RSK1可能作为乳腺癌预后的新指标。⑷ETV6具有促进乳腺癌细胞增殖克隆能力、抑制凋亡的作用。⑸相对与临床常用的诊断指标，HBP1、ETS1、ETV6、RSK1对乳腺癌患者的预后预测效果更好。