全文分为二部分： 第一部分： 大鼠肝星状细胞的分离培养鉴定。 目的：为深入探讨肝纤维化的细胞机制，探索经济、稳定的肝星状细胞分离和培养方法。 方法：采用SD雄性，成年大鼠，450～500g，用1％的戊巴比妥钠，40mg/kg剂量，腹腔麻醉，皮毛酒精消毒，开腹游离肝门静脉，插管。用酶I(0.05％Ⅳ型胶原酶、0.1％Pronase E)原位灌流大鼠肝脏，酶Ⅱ(0.1％Ⅳ型胶原酶、0.04％Pronase E、0.005％DNAase I)消化剪碎的肝组织，两次低速离心去除肝细胞，用18％的Nycodenz密度梯离心纯化肝星状细胞。台盼蓝试验测存活率，应用免疫荧光检测Desmin在细胞中的表达，鉴定肝星状细胞纯度。 结果：刚分离的肝星状细胞为圆形，10p,m大小，胞浆内充满折光脂滴，肝星细胞的得率为1×10<7>～3×10<7>/肝，存活率为95％。约90％肝星状细胞.Desmin表达阳性。 结论：原位灌流法是一种有效的大鼠肝星状细胞的分离和培养方法。 第二部分： 缺氧调节肝星状细胞基质金属蛋白酶及其活性水平机制的研究。 目的：用氯化钴(CoCl<,2>)干预肝星状细胞复制缺氧模型，探讨缺氧对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase 2，MMP-2)表达、活性的影响和调节机理，为肝纤维化防治寻找一个新的切入点。 方法：体外培养HSC-T<,6>细胞，免疫细胞化学检测HSC-T<,6>细胞α-sMA，desmin表达。用不同浓度的CoCl<,2>(0μM，50μM，100μM，200μM)，分三个时间点(6h，12h，24h)造成HSC-T<,6>细胞缺氧，RT-PCR，酶图法分别检测MMP-2 mRNA表达及其酶活性；Western-blotting检测缺氧诱导因子-1 Q(Hypoxia.mducible factor-1 α，HIF-1 α)表达；电泳迁移率变动分析(EMSA)检测HIF-1 α对MMP-2基因的调节作用。 结果：免疫细胞化学检测显示：HSC-T<,6>细胞胞浆显棕黄色，α-sMA和desmin阳性。Hsc-T<,6>缺氧诱导后：RT-PCR检测显示：随CoCl<,2>浓度的递增缺氧加重，MMP-2基因表达上调，同时间点不同浓度比较，均有显著性差异(F=37．850，P<0.001)；不同时间点之间比较，均有显著性差异(F=7．503，P<0.003)。明胶酶图法检测显示：6h组，HSC-T<,6>随CoCl<,2>浓度的递增缺氧加重，MMP-2的活性逐渐下降，各浓度之间比较之间有显著性差异(F=29．54，P<0.01)；Western．blotting检测显示：6h组，HSC-T<,6>随COCl<,2>浓度的递增缺氧加重，HIF-1 α表达呈剂量依赖性增加，当CoCl<,2>浓度达到250μM HIF-1 α表达量达到最大，细胞死亡量显著增加：EMSA检测显示：核蛋白提取物与MMP-2基因探针(含缺氧反应元件)共浴后，电泳迁移条带产生延迟现象，竞争性序列能部分抵消其结合。 结论：用CoCl<,2>缺氧诱导剂成功复制了肝星状细胞缺氧模型， MMP-2 mRNA表达上调，同时酶活性下降。HIF-1 α可能参与了缺氧条件下MMP-2的表达调节。酶活性下降的机理有待进一步研究。改善肝纤维化等慢性肝病导致的肝脏缺氧有望成为肝纤维化逆转的一个新策略。