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肝素为一种存在于动物体内的酸性粘多糖，具有较多的生理功能。本研究以黑龙江林蛙、东北林蛙、黑斑蛙三种蛙的肝脏为原料，提取肝素，主要是采用超声水提和超声碱提两种方法对蛙肝脏中的粗多糖进行提取，然后对其纯化与精制，得到较纯的肝素，同时测定并比较两种方法所得肝素的抗凝血活性。本课题对蛙肝脏中肝素的研究方法及结果如下：蛙肝脏中基本成分的检测，采用国家标准检测方法对三种蛙肝脏中的水分、粗脂肪、粗蛋白、灰分的含量进行测定。测得三种蛙肝脏中4种成分的含量分别为：黑龙江林蛙7.33%，3.59%，12.12%，2.27%；东北林蛙6.02%，9.50%，32.75%，4.75%；黑斑蛙6.04%，10.79%，24.35%，4.96%。测定基本成分的含量是为了对蛙肝脏中的成分有一个基本的了解，为后续实验提供基础数据。肝素提取方法的建立，通过单因素试验和正交试验确定超声水提和超声碱提两种提取方法的最佳工艺条件，其中水提最佳工艺参数为：超声前加热时间10min，超声时间15min，料液比1:25，醇用量为提取液量的1.5倍；碱提最佳工艺参数为：超声前加热时间40min，超声时间10min，料液比1:20，碱液浓度1.5mol/L。目的是为了最大程度的将蛙肝脏中的多糖提取出来，进而提高肝素的产率。纯化与精制，采用过氧化氢两次氧化法对水提和碱提所得的粗多糖进行纯化，即向样品溶液中加两次过氧化氢溶液，使其氧化脱色，除去杂质，最终得到较纯的肝素。采用浓硫酸氧化法检测其纯化前后肝素含量，得出黑龙江林蛙、东北林蛙、黑斑蛙肝脏中肝素的含量分别为：水提粗品肝素1.99%、1.45%、1.47%，水提精制肝素0.225%、0.107%、0.140%，碱提粗品肝素2.02%、1.95%、1.84%，碱提精制肝素0.215%、0.144%、0.137%。采用天青A染色法测得黑龙江林蛙、东北林蛙、黑斑蛙肝脏中肝素的效价分别为：水提63.12、57.2、93.48U；碱提72.76、123.84、144.6U。红外光谱分析，通过对三种蛙肝脏中提取物红外光谱的分析，能够确定三种蛙肝脏中均有肝素存在，并且三种蛙肝脏中所存在的肝素类型相同，结构相似。超声碱提法所得肝素比超声水提法所得肝素纯度更高，杂质相对较少。纯化后肝素比粗品肝素纯度高，杂质峰少，各特征峰更明显。其中肝素较易纯化且纯度较高的为东北林蛙和黑斑蛙。抗凝血活性分析，应用凝血酶原（PT）试剂盒对所得肝素样品进行抗凝血活性的分析，得出三种蛙肝脏中的肝素均具有较好的抗凝血活性，而超声水提法和超声碱提法两种提取方法对肝素抗凝血活性的影响较小。本课题对三种蛙肝脏中肝素的含量及其抗凝血活性进行了研究，最终证实了蛙肝脏中肝素的存在，且含量较高。该研究不但为蛙肝脏中肝素的研究奠定了基础，同时也为抗血栓药物的研究提供了新的途径。