产低温蛋白酶菌株的筛选及酶学特性研究

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xingxingshuaige
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本研究通过对产低温蛋白酶菌株的筛选及酶学特性研究,试验结果如下:1.从新疆冰川高寒地区阿勒泰进山口植物根际冻土中分离出一株产低温蛋白酶菌株,通过平板菌落形态及显微镜形态结合生理生化鉴定,初步鉴定这一株菌为沙雷氏菌(Serratia sp.)。对菌株A29-2的16S rDNA序列进行同源性分析,鉴定结果为:菌株A29-2与标准菌株NR042356.1在同一支系,相似率达到99%,故菌株A29-2鉴定为沙雷氏菌(Serratia ureilytica strainNiVa51),与传统鉴定相统一。2.对冰川细菌Serratia sp.A29-2发酵产低温蛋白酶条件进行优化,通过正交试验优化培养基成分和相应曲面法优化发酵条件,研究结果为:最佳培养基组成为蛋白胨15.0g/L、酵母粉5.0g/L、麦芽糖10.0g/L、CaCl20.5g/L。在此基础上优化发酵条件,最优发酵温度22℃、发酵时间60h、初始pH值7.0、NaCl质量分数为1.00%,测得发酵液的酶活力54.25U/mL,初始酶活力为28.17U/mL,比初始酶活力提高了48.07%。3.对冰川细菌Serratia sp.A29-2产胞外蛋白酶进行分离、提取。通过(NH4)2SO4分级沉淀、透析脱盐、SDS-PAGE电泳,结果得到此蛋白酶的分子量为45~66.2KDa。并对该菌株产低温蛋白酶酶学性质进一步研究,结果表明:该酶最适反应温度40℃,最适反应pH7.0,Ca2+对该酶有显著的激活作用,Fe3+、PMSF对该酶有显著的抑制作用,且该酶Km为3.17mol/L,Vmax为0.0088mol/(L·S),有很强的催化活性,具有低温蛋白酶的特性。4.以新疆特色干果巴旦杏,核桃为原料,将菌株A29-2所产低温蛋白酶应用在巴旦杏乳、核桃乳中,得出巴旦杏乳、核桃乳中游离氨基酸含量和总氨基酸含量均明显增加,且巴旦杏乳样品>核桃乳样品,必需氨基酸含量增加幅度大于非必须氨基酸的增加幅度。
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