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柑橘黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害,俗称柑橘的“癌症”。它几乎为害柑橘的所有栽培品种,包括宽皮柑橘类、橙类、柚类等柑橘属的植物。观察症状是田间判断黄龙病最简便和快速的方法。一直以来,人们主要通过叶片症状来识别黄龙病,但由于叶片症状比较复杂,且容易与其他生理性病害相混淆,从而造成不必要的损失。因此找到一种容易被人掌握的症状对病害的识别和控制具有重要意义。
本研究分别从田间采集了4种不同的柑橘品种,包括:砂糖橘、蕉柑、不知火和天草,通过描述不同品种上红鼻子果症状,测定果实品质,利用PCR技术检测红鼻子果黄龙病亚洲种的带菌率,比较显症叶片与果实带菌率,利用扫描电镜技术观察果实病组织变化等方面对红鼻子果进行了研究。
主要研究结果如下:
1、宽皮柑橘红鼻子果在着色期表现从果柄部位着色,至成熟期其他部位仍不能着色呈青绿色;果实变小,果轴歪斜、种子败育等。不同品种之间的症状有着细微的差别,其中砂糖橘和不知火的症状最为典型。
2、检测砂糖橘红鼻子果可溶性固形物、可滴定酸、维生素C含量及砂糖橘、蕉柑、不知火、天草的果实体积、着色率品质指标,结果表明砂糖橘可溶性固形物和维生素C含量显著降低,而可滴定酸含量没有显著变化;4个品种果实体积都显著变小,其中砂糖橘健康果实是红鼻子体积的2.4倍,蕉柑健康果实是红鼻子果体积1.9倍,不知火健康果实是红鼻子果体积的2.7倍,天草健康果实是其红鼻子果的1.4倍;四个品种的果皮着色率均在0.5以下,与健康果实有着明显的差别。
3、利用常规PCR、Nested-PCR和TaqMan实时荧光定量PCR检测4个品种红鼻子果带菌量和阳性检出率,结果表明三种PCR技术均可以检测到黄龙病菌,且阳性检出率都在98%以上,其中Nested-PCR阳性检出率为98.9%,常规PCR阳性检出率为98.3%,TaqMan实时荧光定量PCR灵敏性最高,阳性检出率达到100%,说明红鼻子果与黄龙病菌相关性很高,可以作为田间检测黄龙病的典型症状。利用TaqMan实时荧光定量PCR检测发现品种间红鼻子果带菌率没有显著性差异,但不同红鼻子果个体之间病原含量差异很大,相差103。利用TaqMan实时荧光定量PCR检测砂糖橘上斑驳、黄化叶片及其红鼻子果、病株上不显症果实病原浓度,结果表明红鼻子果带菌率和病菌含量最高,依次为斑驳叶片、黄化叶片、不显症果实。
4、实时荧光PCR技术检测四个品种果实和果柄病原浓度发现,砂糖橘果柄病原含量最高,对其进行扫描电镜发现,韧皮部筛管细胞杂乱无章,且其中有大量的淀粉粒沉积,堵塞了筛管,这可能是造成红鼻子果症状出现的主要原因,为柑橘黄龙病致病机理的研究奠定基础。