论文部分内容阅读
目的：探讨诱导性一氧化氮合酶(iNOS)以及精氨酸循环相关酶在内毒素诱导性葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis，EIU)眼组织中表达。方法：35只SPF级Wistar大鼠随机分成7组，实验组双后足底注射200μl的伤寒杆菌内毒素(Salmonella typhimurium Lipoplysaccharide，LPS)，对照组注射等量无菌生理盐水。大鼠分别在LPS注射后0、3、6、12、24、和48h腹腔注射水合氯醛过量致死，一侧眼球在手术显微镜下用微量取样器行前房穿刺收集房水，检测房水中蛋白浓度、炎细胞计数和NO含量。然后剜出眼球采用半定量逆转录聚合酶链反应(semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)检测iNOS、精氨酸代琥珀酸合成酶(argininosuccinate synthetase，AS)、精氨酸代琥珀酸裂解酶(argininosuccinate lyase，AL)mRNA在各组大鼠眼组织中的表达。对侧眼球保持完整，采用免疫组织化学染色方法检测iNOS和AS在眼组织中的表达及分布。结果：RT-PCR结果显示，iNOS mRNA表达量在LPS注射后3h开始上升，12h达到最高，之后逐渐下降；AS mRNA的变化较iNOS mRNA略迟2～3h，6h明显升高，12h时诱导表达量最高(是刺激前的3.5倍)；AL mRNA在LPS注射前后变化较小(无统计学意义)。免疫组织化学方法结果显示，iNOS和AS蛋白主要见于虹膜睫状体上皮细胞、渗出的炎性细胞以及视网膜内层细胞(神经节细胞层、内从状层、内核层)。房水中蛋白浓度、炎细胞计数和NO含量在LPS注入后6h明显升高，24h达到高峰，之后开始下降。结论：LPS刺激后EIU发生发展中，iNOS被诱导，产生大量的NO，在此过程中，其底物精氨酸主要来源于NO的再生系，NO-瓜氨酸循环。