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棘阿米巴性角膜炎是一种严重的致盲角膜病,自1974年Nagington报道了首例棘阿米巴角膜炎以来,棘阿米巴角膜炎病例逐年增加.国内外对棘阿米巴原虫及棘阿米巴角膜炎病理机理的实验研究日渐深入.棘阿米巴所引起的角膜感染与虫株的类型有一定关系.依据形态学分类,棘阿米巴可分为3个类群,18个种.3个类群棘阿米巴形态差异较明显,而类群内种的水平的鉴别则比较困难.根据文献报道,感染角膜的棘阿米巴多属于类群Ⅱ(A.castellanii,A.polyphaga,A.hatchetti,A.rhysodes,A.lugdunensis,A.quina,A.griffini)也有部分虫株属于类群Ⅲ(A.culbertsoni).传统的形态学分类可对棘阿米巴进行一定程度的鉴别,但形态学鉴定具有明显的局限性.近年来,随着分子生物学的发展,更多的研究者依据棘阿米巴的基因特点对其进行分类研究.rRNA基因序列在生物进化中既有较强的保守性,又有一定的可变和高变区,因此此基因序列成为了研究生物进化和分类的热点.根据18srDNA分型结果显示,感染角膜的虫株多属于T4型,也有少数虫株属于T3和T6型,这些结果表明在棘阿米巴的生物进化过程中,某些基因变异可能导致了该型棘阿米巴对角膜致病性的产生. 棘阿米巴性角膜炎的发生是宿主、环境和生物等多因素共同作用的结果.患者的临床表现受多种因素的影响,如患者就诊时间、就诊前使用药物情况等等.目前有文献报道,该病的临床表现可能因感染虫株基因型的不同而有所差别,如临床上表现为环形浸润的患者所感染的虫株多为T4型,而表现为非典型的、多处点状上皮病变患者所感染的虫株为T3型.因此,棘阿米巴基因型不同是否决定了角膜炎的临床表现这项研究具有重要的意义.一、棘阿米巴的形态学研究目的:鉴定棘阿米巴形态分类方法:棘阿米巴角膜炎分高株保存虫株转种1.5﹪NNA培养基(加活大肠杆菌),28℃培养2-3天,100×10显微镜下观察记录滋养体形态特点.转种5天后,显微镜下观察记录包囊形态特点,每株虫株记录20个包囊直径.根据文献形态学分类标准,对39株保存虫株进行形态分类.取患者角膜,2.5﹪戊二醛固定后,电镜观察病变角膜组织中的棘阿米巴包囊.结论:致角膜炎棘阿米巴虫株形态学分类多属于类群Ⅱ,少部分虫株属于类群Ⅲ.二、阿米巴的18S rDNA基因型鉴定目的:鉴定棘阿米巴角膜炎分离株的18S rDNA基因型方法:转种培养39株致角膜炎棘阿米巴虫株,提取虫株全基因组DNA,应用棘阿米巴属特异的引物,通过PCR反应扩增部分18S rDNA序列,扩增产物测序后,采用分子生物学软件ClustalX及MEGA2对所测序列进行分析,与基因库中已有序列进行比较,分析同仁医院保存虫株基因型特点与其他国家和地区的虫株基因型异同.结论:感染角膜的棘阿米巴虫株根据18SrDNA特点分型多属于T4基因型,部分虫株属于T3基因型,与国外的分型结果相似.感染角膜的棘阿米巴多属于特定的基因型.三、棘阿米巴角膜炎临床表现与虫株基因型关系初步探讨目的回顾性分析棘阿米巴性角膜炎患者的临床特点,分析患者所感染的棘阿米巴虫株18S rDNA基因型与临床表现之间的关系.方法对北京同仁医院眼科十二年中(1991.5~2003.4)确诊的84例棘阿米巴角膜炎患者进行性别、年龄及职业分布及实验室检查的分析;分析病例记录完整的12例患者(2000.9~2003.4)的临床特点,探讨患者所感染的棘阿米巴虫株基因型与临床表现之间的关系.结论棘阿米巴角膜炎患者的临床表现需结合多种因素综合分析,不同基因型的虫株对角膜致病性是否有所不同,是否会引起棘阿米巴角膜炎不同的临床表现尚需进一步探讨.