“猪高热综合症”发病场细菌的分离鉴定及蓝耳病血清学检测

来源 :浙江大学动物科学学院 浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qxq00007
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2001年7月开始,在浙江省和周边地区大面积爆发了一种主要表现为病猪持续高温、皮肤发红、食欲废绝为主要特征的猪病,有极高的发病率和死亡率。给养殖业带来了极大的破坏。本病与猪繁殖与呼吸综合征、断奶仔猪多系统衰竭综合征、仔猪渗出性皮炎、猪肾病皮炎综合症以及猪呼吸综合征在症状、流行病学以及病理学特征等方面均有某些相似之处。目前,已开展了多方面的研究,但关键病原及其致病机理尚有待确认。   在前期临床观察和流行病学调查的基础上,进一步,采集具有典型“猪高热综合症”病变特征的心、肝、脾、肺、肾、胰、小肠和淋巴结等制作成石蜡切片,经H.E染色后观察,显示肾小管上皮细胞变性、坏死、脱落、肾脏出血、肾小球见有萎缩;肺的病理变化差异较大,可见到出血、气肿、肺泡壁增厚、单核淋巴细胞等炎性细胞渗出和肺泡内充满纤维素样蛋白渗出物等:肝脏见液化性坏死灶、肝小叶间结缔组织增生;脾脏有噬酸性粒细胞浸润,脾小体周围出血;淋巴结中见有合胞体等。   病死猪无菌解剖,蘸取肝、肺、心、脾等组织划线接种于10%绵羊血平板,分离到的细菌进一步纯化,首先用革兰氏染色将其分为革兰氏阴性与阳性,然后将细菌保存于甘油肉汤中。   经2003-2005年近三年的分离鉴定,共获得146株细菌。其中,2003年分离到22株细菌,检出率45.7%,2004年分离到74株细菌,检出率56.1%,2005年分离到50株细菌,检出率58.3%,细菌检出率逐年升高,显示“猪高热综合症”病例中细菌继并发感染有逐年增加的趋势。   “猪高热综合症”病例中有多种继发、并发的细菌,总起来说,革兰氏阳性细菌所占的比例远多于革兰氏阴性细菌,革兰氏阳性细菌占细菌总数的67.1%,革兰氏阴性细菌占32.9%。从细菌种类上看,葡萄球菌所占比例最高,为54.8%,第二位为肠杆菌科细菌/埃希氏大肠杆菌,占30.8%,再次是猪链球菌,占8.2%。同时猪链球菌与葡萄球菌所占比例逐年升高,而肠杆菌科细菌比例比较恒定。葡萄球菌中,金黄色葡萄球菌的比例也在升高,说明金黄色葡萄球菌的危害也在升高。   参照文献合成了用于特异性扩增猪链球菌和猪链球菌1、2、1/2、7、9、14等多种主要致病血清型的PCR引物,经对分离到的猪链球菌加以检测,表明2型猪链球菌占8/12,在浙江省为最主要的流行血清型,而其余四株猪链球菌为分型PCR所不能检测的血清型。   对麦康凯平板上不生长的4株革兰氏阴性细菌,参照文献合成了一对用于检测副猪嗜血杆菌的引物进行扩增,检测到1株副猪嗜血杆菌。由于检出率很低,我们怀疑通过实质脏器分离副猪嗜血杆菌的检出率很低。   为了更好地指导临床用药,并研究分离细菌的耐药情况,将分离的葡萄球菌进行药敏试验。选取“猪高热综合症”病例中分离到的80株葡萄球菌,并参照NCCLS(2000版)选取了14种抗生素对这80株葡萄球菌运用Kirby-Bailer法进行药敏试验,结果表明:利福平和先锋Ⅵ对葡萄球菌的高敏菌株较高,分别为72.5%和68.8%;而氨苄青霉素,氟哌酸,林可霉素,复方新诺明,青霉素G和卡那霉素的耐药菌株较高,分别为100%、100%、97.5%、88.8%、62.5%和60%。在所有葡萄球菌中有5株耐万古霉素。所分离的葡萄球菌以耐药6-10种居多,占葡萄球菌总数的76.25%,未发现不耐药的菌株与全部耐药的菌株。这为抗生素的治疗提供了一定的试验依据。   为了研究PRRSV在“猪高热综合症”中所起的作用,选取了浙江省的9个猪场,采集不同怀孕阶段、胎次的母猪以及不同日龄阶段的仔猪和肉猪的血清,测定针对PRRSV的抗体水平,按日龄胎次等排序作图,并将测定结果与临床发病状况对照评估。结果发现:处于发病严重状况下的猪场其PRRSV抗体参差不齐、混乱,而疫情相对稳定、发病不严重的猪场抗体水平较整齐。同时还对蓝耳病疫苗进行了免疫前后的临床观察和抗体水平监测,结果在应用疫苗后,疫情被有效控制,且抗体整齐度明显上升。
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