鸡球虫病是危害养鸡业的最重要寄生虫病之一,分布广,感染率高,给养鸡业造成巨大的经济损失。当前,药物防治是控制球虫病的主要手段,但是随着耐药虫株的普遍产生及绿色食品概念的形成,人们期望用更好的手段取代之。随着分子生物化学、免疫学和基因工程技术的发展,依靠生物技术来研制基因工程疫苗或核酸疫苗已经成为研究热点。本课题对E tenella3-1E基因进行研究,为进一步研究亚单位疫苗奠定基础。　　 本试验对E tenella ZJ株的3-1E基因进行了克隆和序列分析。根据已报道的堆型艾美尔球虫3-1E基因序列设计引物,以E tenella ZJ株孢子化卵囊子孢子中提取的总RNA为模板用RT-PCR方法扩增得到鸡球虫子孢子表面抗原3-1E基因。将PCR产物克隆至pUCm-T转化DH5α感受态,经酶切和PCR鉴定获得阳性重组菌,并进行测序。序列分析表明:E tenella ZJ株3-1E基因的ORF为513个碱基,共编码171个氨基酸,与国外报道的鸡球虫3-1E基因序列进行比较,发现有3处发生碱基突变,其核苷酸序列同源性为99.5％;有两个氨基酸发生突变,氨基酸序列同源性为98.2％。　　 将重组质粒和表达载体pET-30a分别以EcoRⅠ、.SalⅠ酶切后构建重组表达载体pET-30a-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白的分子量约为27kDa,诱导6h的蛋白表达量可达到47.02％。　　 以经镍柱纯化的重组融合蛋白作为免疫原,添加人参纳米颗粒作为佐剂,比较了3-1E重组融合蛋白(100μg胸肌注射)、低剂量3-1E重组融合蛋白(10μg)+人参纳米颗粒、中剂量3-1E重组融合蛋白(50μg)+人参纳米颗粒、高剂量3-1E重组融合蛋白(100μg)+人参纳米颗粒的免疫原性,另设空白对照组。在3日龄时进行首免,首免后两周后以相同剂量进行二免,二免后一周开始每组心脏采血,进行淋巴细胞转化试验、酶联免疫试验和胸腺细胞检测法检测IL-1活性。实验结果表明,各免疫组特异性抗体于二免后三周达到较高水平,随后开始下降,但直至二免后六周仍维持在一定水平;淋巴细胞增殖水平和IL-1诱生活性均在二免后四周达到高峰。结果表明:3-1E融合蛋白免疫后能显著增强淋巴细胞增殖水平、血清抗体水平和IL-1诱生活性,人参纳米颗粒能显著提高3-1E融合蛋白的免疫应答水平。　　 探讨了3-1E重组融合蛋白(100μg胸肌注射)、低剂量3-1E重组融合蛋白(10μg)+人参纳米颗粒、中剂量3-1E重组融合蛋白(50μg)+人参纳米颗粒、高剂量3-1E重组融合蛋白(100μg)+人参纳米颗粒的免疫保护效果。设上述4个实验组,外加空白对照组、感染对照组、药物对照组。免疫程序同上,二免后两周按1.5×104个/羽的剂量,用新鲜扩繁的孢子化卵囊攻毒,观察其免疫效力。结果表明:高剂量3-1E重组融合蛋白+人参纳米颗粒免疫组鸡只的增重率、相对增重率、卵囊产量下降率、病变值下降率和综合保护效果(ACI)值最高,免疫保护效果最好。结果显示:3-1E融合蛋白对鸡只感染球虫具有一定的免疫保护效果,人参纳米颗粒作为佐剂对融合蛋白有协同作用。　　 综上,3-1E重组融合蛋白对球虫感染具有一定的免疫保护效果,人参纳米颗粒也显示出了良好的佐剂作用,但若要应用于实践,还有待进一步研究。