论文部分内容阅读
奶牛乳腺炎是奶牛最常见的疾病之一，严重制约着奶牛养殖业的发展，寻找有效药物来治疗或预防乳腺炎，成为现在研究热点。黄芩苷（Baicalin）是从黄芩干燥根中提取的黄酮类化合物，抗炎作用显著，但其作用机制尚不清楚。诱导型热休克蛋白72（HSP72），是HSP家族里含量最多研究最广泛的一种分子伴侣蛋白，具有抗炎抗凋亡作用。核转录因子（NF-κB）在细胞炎性反应和细胞凋亡调控中具有重要作用，但其在奶牛乳腺上皮细胞炎性损伤中的调节机制尚不清楚。TNF-α和IL-1β是两种重要的促炎细胞因子，常伴随着炎症反应产生，并损伤组织和细胞。Bcl-2家族对细胞凋亡具有显著调控作用，其中Bcl-2具有抑制凋亡的作用，而Bax则能够通过拮抗Bcl-2促进凋亡。Caspase-3是caspase家族中最终的凋亡执行者。目前，有关黄芩苷在奶牛乳腺上皮细胞上的保护作用机制研究甚少，在LPS刺激条件下，其是否对细胞有保护作用也未见报道。本研究通过检测黄芩苷对乳腺上皮细胞和对 LPS诱导的乳腺上皮细胞 TNF-α、IL-1β、Bcl-2、Bax、caspase-3、HSP72、NF-κB和IκB表达的影响，探究黄芩苷的作用机制。 本试验通过酶消化组织块法和酶消化法于体外培养获得细胞，免疫组化鉴定结果证实，两种方法成功培养的均为乳腺上皮细胞。将培养获得的乳腺上皮细胞随机分为4个组，对照（control）组为空白组，LPS组为LPS刺激12 h组，Bai组为黄芩苷预保护12 h组，LPS+Bai组为黄芩苷预保护12 h后LPS刺激12 h组，运用实时荧光定量，ELISA和western blot等方法分别检测 TNF-α、IL-1β、Bcl-2/Bax、caspase-3、HSP72、NF-κB和IκB的基因及蛋白的表达；CCK-8检测法检测各组细胞活力。 结果显示，LPS组TNF-α、IL-1β、caspase-3、NF-κB和IκB的表达量与空白组相比极显著升高（P<0.01），LPS+Bai组与 LPS组相比上述指标表达量显著降低（P<0.05）；同样与空白对照组相比，LPS组Bcl-2/Bax相对表达量和细胞活力极显著降低（P<0.01）， LPS+Bai组与LPS组相比上述指标极显著升高（P<0.01）；同样与空白对照组相比，LPS组和Bai组HSP72表达升高，差异显著（P<0.05），LPS+Bai组差异极显著（P<0.01）。 综合上述，LPS刺激乳腺上皮细胞能够引起细胞炎性反应和细胞凋亡，而黄芩苷可以减弱LPS引起的损伤，并很可能是通过调控HSP72和NF-κB达到保护细胞的作用。