【摘 要】
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哺乳动物卵巢中,99%的卵泡会在不同发育阶段闭锁。颗粒细胞(GC)凋亡是动物出生后卵泡闭锁的始动因素。蛋白质是生命活动的执行者。比较健康卵泡(HF)和闭锁卵泡(AF)内GC蛋白表达谱,对探明哺乳动物卵泡闭锁的发生机制,提高优秀母畜繁殖潜力、治疗某些不孕症具有重要意义。本研究采用串联质谱标签(TMT)技术比较了来自直径1～2mm的健康、闭锁的猪小有腔卵泡GC的蛋白表达谱,并对差异表达蛋白进行了 GO
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哺乳动物卵巢中,99%的卵泡会在不同发育阶段闭锁。颗粒细胞(GC)凋亡是动物出生后卵泡闭锁的始动因素。蛋白质是生命活动的执行者。比较健康卵泡(HF)和闭锁卵泡(AF)内GC蛋白表达谱,对探明哺乳动物卵泡闭锁的发生机制,提高优秀母畜繁殖潜力、治疗某些不孕症具有重要意义。本研究采用串联质谱标签(TMT)技术比较了来自直径1～2mm的健康、闭锁的猪小有腔卵泡GC的蛋白表达谱,并对差异表达蛋白进行了 GO富集分析和KEGG信号通路分析,旨在筛选GC中调控卵泡闭锁的关键蛋白,为阐明卵泡闭锁发生机制奠定基础。试验结果如下:(1)应用TMT技术对分离的健康卵泡颗粒细胞(HFGC)和闭锁卵泡颗粒细胞(AFGC)样品进行检测,总共鉴定出6221个蛋白。经过t-test分析,其中在HFGC和AFGC之间表达水平具有统计学差异(P<0.05)且符合筛选条件的蛋白有499个,其中有327个蛋白在AFGC组中表达显著上调,172个蛋白表达显著下调,差异表达倍数最高的上调蛋白是SLC43A2(FC:11.44813),差异表达倍数最高的下调蛋白是SMIM1(FC:11.5),这两个蛋白可能作为卵泡闭锁的GC生物标志物。(2)对差异蛋白数据运用GO富集分析发现,差异表达蛋白主要集中在调节炎症反应、细胞稳态、线粒体沿微管运输、吞噬作用等生物过程,细胞骨架、细胞外基质、线粒体外膜等细胞成分,GTP酶活性、内肽酶抑制剂活性、GTP绑定、钙离子结合、磷脂结合等分子功能方面。(3)对差异蛋白数据运用KEGG通路富集分析发现,相比于HFGC,AFGC在Jak-STAT信号通路、雌激素信号通路、自噬信号通路、p53信号通路等发生了显著改变。(4)Western blot验证了随机选择的10个表达显著改变的蛋白,结果表明,western blot结果与TMT检测结果基本一致,说明本次测序结果真实可靠。综上所述,GC在卵泡闭锁前后的蛋白表达谱发生了明显变化;SLC43A2和SMIM1可能作为卵泡闭锁的标志物;Jak-STAT信号通路、雌激素信号通路、自噬信号通路、p53等信号通路可能对卵泡闭锁发挥着重要作用。
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