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禽流感(Avian influenza，AI)是由正粘病毒科流感病毒属A型流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起的一种禽类感染和/或疾病综合征。目前，我国部分地区禽流感的流行病学调查表明，中等毒力以下H9N2亚型禽流感病毒的感染病例有增加的趋势，给我国养禽业造成巨大的经济损失。因此，对该病的快速诊断显得尤为重要。
本研究对新制备的一株抗H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体8D5进行一系列特性鉴定，证明它是轻链为Kappa链的IgG1，针对禽流感病毒HA蛋白，研究还发现单抗8D5腹水HI效价为131og2，ELISA效价为1：25600;其具有中和活性，中和效价为10-1.73/0.2mL。血凝抑制试验中，单克隆抗体8D5对36株H9亚型禽流感病毒具有良好的反应性；与2株同亚型禽流感病毒呈弱反应性，HI效价小于31og2；而与1株H9亚型禽流感病毒不反应；与减蛋综合征病毒、新城疫病毒、H7亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒均不反应。
以单克隆抗体8D5为包被抗体，兔抗H9亚型AIV多克隆抗体为第二抗体，山羊抗兔IgG-HRP为酶标记抗体，初步建立了检测H9亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。检测结果显示该方法具有良好的特异性，与H9亚型AIV呈强阳性反应，而与H5亚型AIV、H7亚型AIV、新城疫病毒、鸡产蛋下降综合征病毒(EDS-76V)、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒均无反应。以含H9亚型AIV尿囊液为样品，通过对样品不同稀释度的测定，证明新建立的双抗体夹心ELISA方法比血凝抑制试验敏感4倍以上。以经典鸡胚分离病毒法与新建立的双抗体夹心ELISA方法作平行试验，对116份人工感染H9亚型AIV雏鸡咽肛棉拭子样品进行检测，前者检出105份阳性，后者检测94份阳性，两者的符合率为89.52％。
本研究采用柠檬酸三钠作为还原剂制备了不同粒径的胶体金颗粒，选择20nm的胶体金颗粒与纯化的单克隆抗体8D5进行金标记。同时确定胶体金与单克隆抗体的最佳标记量为32.4μg/mL，最适pH值为7.5，采用进口Ahlstrom8964玻璃纤维膜作为样品垫和金垫材料，Millipore135硝酸纤维素膜作为层析材料组装试纸条，该试纸条对超离纯化的H9N2亚型禽流感病毒TS株的最低检测限为38.13μg/mL。初步证明了整个胶体金试纸条体系可正常运行。