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研究背景:子痫前期是在妊娠20周后出现,以新发高血压和蛋白尿为主要特征的多器官功能障碍或者功能衰竭,滋养细胞浸润受损和子宫螺旋动脉顺应性改变导致的胎盘异常和胎盘灌注减少是在子痫前期的临床表现之前出现的早期病理学发现,大量临床数据表明子痫前期患者体内胎盘源性微囊泡(pc MVs)明显高于正常孕妇,全身小动脉痉挛是子痫前期的重要病理生理改变,血管的收缩与胞浆内钙离子水平密切相关,血管平滑肌细胞内钙离子水平的不同会诱发血管不同强度的收缩,故猜测pc MVs对血管平滑肌细胞内钙离子浓度的增高有促进作用。研究目的:体外实验证实pc MVs可引起平滑肌细胞内钙离子增加,这种作用与PE引起的血管痉挛有关。并且探讨pc MVs可能导致血管痉挛参与PE发病。研究内容:1.胎盘绒毛组织体外培养制备pc MVs;2.pc MVs作用于血管平滑肌细胞,利用流式和激光共聚焦技术观察平滑肌细胞内钙离子浓度的变化,并研究钙离子通道阻滞剂对pc MVs所致平滑肌钙离子内流的拮抗作用。研究方法:1.缺氧/复氧模型培养制备正常孕妇胎盘源性微囊泡,保留胎盘绒毛,去除血管等结缔组织,放入37℃无菌培养箱中,分别以8%以及2%的氧气浓度各培养十二小时,培养结束后取上清。接着进行离心,在4℃1500g离心20min,取上清;进一步在4℃13000g离心2min,取上清;4℃100000g超速离心1h,弃上清,PBS重悬,重复超速离心1次,弃掉上清液沉淀即为pc MVs。2.SD大鼠脑源性平滑肌细胞的无菌培养,以底面积9cm细胞培养皿培养细胞,细胞自复苏后第三代开始用于实验,数目保持在12×10~6(个)。3.pc MVs处理平滑肌细胞,将平滑肌细胞分为四组,分别是未经任何处理的空白组、低浓度pc MVs处理组、高浓度pc MVs处理组、高浓度pc MVs处理+药物组,处理时间及处理手段保持一致,药物为钙离子通道阻滞剂(尼莫地平),低浓度pc MVs选用5×10~4(个/ul),高浓度pc MVs选用2×10~5(个/ul),每组重复四次以减小误差。4.流式细胞仪观察平滑肌细胞内钙离子浓度变化,细胞经过滤网过之后显微镜下观察保持数目大致相同上流式检测,钙离子荧光探针选用Fluo3-AM。5.激光共聚焦显微镜观察平滑肌细胞内钙离子浓度变化,钙离子荧光探针选用Fluo3-AM,平滑肌细胞核荧光探针选用hochest33342,每组的观察标准一致。研究结果:在流式细胞仪观测结果,选用标准为共收取两万个平滑肌细胞观察每组细胞中钙离子数目(个)的变化,排除误差组,空白组的三组结果分别为2194、2850、2893,低浓度组分别为4228、3766、3620,高浓度组分别为7201、5667、7634,高浓度+药物处理组分别为5360、3968、4369,p=0.000,差异具有统计学意义。激光共聚焦显微镜观察下,空白组周围钙离子荧光强度不明显,低浓度组荧光弱于高浓度组,在经过尼莫地平处理后,高浓度组的荧光强度下降。研究结论:pc MVs可导致血管平滑肌细胞内钙离子浓度升高是引起子痫前期发生血管痉挛的关键因素,该作用可被钙离子通道阻滞剂缓解。