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近年来,随着家禽集约化饲养、高密度饲养等造成全球肿瘤性免疫抑制疫病的爆发,例如ALV-J、MDV、REV等。J亚群禽白血病主要引起以髓细胞瘤和其他细胞恶性肿瘤增生为特征的传染性肿瘤性疾病。自我国出现ALV-J以来,其感染宿主范围不断扩大,发病日龄逐渐提前,导致的肿瘤类型不断增多,给养禽业带来了严重的经济损失。目前对于ALV-J尚无有效的预防和治疗手段,因此寻求一种能有效抑制ALV-J病毒的细胞内防御蛋白是必要的。禽β-防御素(AvBD)是一类广泛存在于禽体内的宿主防御蛋白,主要特征结构是含有6个半胱氨酸残基构成的3对二硫键,是机体防御微生物入侵体内的第一道屏障。具有广谱抗菌、抗病毒、抗真菌的生物学作用,在禽类的先天性免疫系统中发挥重要作用。为进一步研究鸡AvBD的组织分布及抗病毒作用,本研究运用PCR方法,从SPF鸡的肝脏组织中扩增到鸡AvBD6基因。将测序结果与已发现的相关禽β-防御素和不同种属禽β-防御素的氨基酸序列进行同源性分析、绘制分子遗传进化树。结果显示,AvBD6基因前体肽由67个氨基酸残基组成,其cDNA全长为204bp,含有6个稳定的半胱氨酸,分别以1-5、2-4、3-6连接形成3个分子的二硫键,构成稳定的反相平行的3股β-片层结构C-X4-8-C-X3-5-C-X9-13-C-X4-7-C-C,与鸡AvBD7氨基酸同源性最高为62.7%。将鸡AvBD6基因亚克隆到表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-AvBD6,将重组质粒转化到Rosseta(ER2566)感受态细胞,用IPTG诱导表达鸡AvBD6融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在。将鸡AvBD6重组蛋白进行包涵体纯化,再免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体,经ELISA测定鸡AvBD6融合蛋白多克隆抗体效价为1:211。用自制的多克隆抗体建立特异性检测鸡AvBD6分布免疫组化方法,对SPF鸡组织器官中AvBD6进行检测分析,在骨髓的髓系细胞、肺的呼吸毛细管上皮细胞、肾小管上皮细胞、十二指肠的肠绒毛上皮细胞等分布较多。运用建立的鸡AvBD6实时荧光定量PCR检测方法对鸡AvBD6组织表达差异、不同日龄SPF鸡的AvBD6动态表达规律研究,发现:AvBD6在骨髓中表达极高,在肺、肾、肝、脾组织器官的表达量相对较高,其它各组织器官均有不同程度的表达;随着日龄的增长AvBD6呈现“波浪”形规律。为了明确AvBD6是否具有抗ALV-J作用,运用蛋白透析复性法,获得具有天然结构的AvBD6重组蛋白。研究发现,AvBD6重组蛋白具有良好的抑制ALV-J病毒效果,抑制效率达95.6%。在此我们运用免疫组化方法检测AvBD6分布、实时荧光定量PCR检测方法特异性检测AvBD6在各组织的表达量、以及体外AvBD6重组蛋白抑制ALV-J病毒感染初步探究,为进一步研究AvBD的生物学功能、禽类的先天免疫系统奠定基础。