牙周膜成纤维细胞弹性模量与内毒素作用关系的初步研究

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背景与目的:牙周病是指发生在牙齿支持组织(包括牙龈、牙周膜、牙槽骨、牙骨质)的慢性、非特异性、感染性疾病。其最大的危害是导致罹患牙齿的松动脱落,从而引起发音、功能和面部形态变化。人牙周膜成纤维细胞(humanperiodontal ligament cell,hPDLC)是牙周组织的主要细胞,为力学敏感细胞,在牙周组织的修复改建中起很重要的作用。活细胞具有内在的力学性质,能够响应外界环境的变化,通过改变自身的力学性质来调节相应的生物过程中的状态。细胞弹性模量是反映细胞生物力学性质的重要参数,与细胞的移动、分化、凋亡有密切的联系。内毒素是革兰阴性菌细胞壁外膜中的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)成分,是牙周病的重要病因之一。早期关于内毒素对牙周膜成纤维细胞的影响,多集中于内毒素刺激牙周膜成纤维细胞后细胞因子的变化,关于内毒素对hPDLC的力学性质是否产生影响,未见文献报道。本课题采用原子力显微镜初步观察牙周膜成纤维细胞经LPS作用后的弹性模量变化,以期对LPS在牙周炎的致病机理有进一步认识。方法:采用酶消化组织块法获取原代hPDLC,取第5-8代hPDLC用于实验;利用AFM接触模式对hPDLC进行扫描成像,获取hPDLC的超微结构图像;实验分为正常培养组、0.1ug/ml LPS刺激组、1ug/ml LPS刺激组、10ug/ml LPS刺激组;各实验组正常培养后加入含相应浓度LPS的细胞培养液刺激细胞24小时,采用10μm左右微球修饰的原子力显微镜探针,通过AFM获取各组hPDLC细胞核相对应区域的力曲线,借助赫兹模型计算细胞弹性模量,通过方差分析比较各组间的差异。结果:对照组、0.1μg/ml的LPS刺激组、1μg/ml的LPS刺激组、10μg/ml的LPS刺激组hPDLC弹性模量依次为1.958±0.922KPa、1.448±0.999、2.477±1.656KPa、3.654±1.926KPa。统计学分析显示,与对照组相比,0.1μg/ml的LPS刺激组细胞弹性模量明显降低,1μg/ml的LPS刺激组细胞弹性模量无明显差异,10μg/ml的LPS刺激组细胞弹性模量明显升高。各实验组相比,随着内毒素浓度的增加,细胞弹性模量逐渐升高。结论:hPDLC的弹性模量会因LPS的刺激而发生变化,提示LPS在牙周病致病机理方面可能存在新的机制。
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