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单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM),简称单增李斯特菌,是一种常见的食源性致病菌,极易在食品或加工环境中残留,从而引起各种动物源性冷藏食品安全问题。因此,为了有效预防控制LM的感染,提高LM检测效率,本文初步探究了群体感应抑制剂对LM菌落生长、生物膜形成以及LM侵染细胞的影响,并建立一种快速高效检测LM方法。主要实验内容如下:(1)通过测定菌落生长曲线、细菌总蛋白含量、胞外多糖含量变化规律,并通过结晶紫染色法及扫描电镜观察生物膜形态,研究群体感应抑制剂3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和6-氨青霉素烷酸对LM生物学特性的影响等。结果表明,3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮对LM的最小抑菌浓度(MIC)为25μg/mL,最低致死剂量(MBC)为400μg/mL;6-氨青霉素烷酸对LM的MIC为3.12μg/mL,MBC为100μg/mL。两种群体感应抑制剂在一定的工作浓度下,对LM的菌落的生长及生物膜形成均有着一定的调控作用,且随着抑制剂浓度的增加,调控作用逐渐增强。(2)通过MTT检测、乳酸脱氢酶含量检测、细菌黏附率检测等实验,研究3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮和6-氨青霉素烷酸分别在MIC,5MIC,10MIC浓度下,对LM侵染细胞的影响。当3,4-二溴-2(5H)-呋喃酮浓度分别为MIC,5MIC,10MIC时,其对LM侵染Caco-2细胞产生了一定的影响,黏附率抑制率分别为44.41%,67.68%和85.28;而在6-氨青霉素烷酸作用下,最终的黏附抑制率分别为12.17%,59.60%和76.51%。结果表明:LM与Caco-2细胞共同培养时,两种抑制剂均对LM黏附Caco-2细胞有着明显的抑制作用,且随着抑制剂浓度的增加,抑制作用也逐渐增强。(3)将LM毒力基因iap经过原核克隆与表达,得到的表达产物p60蛋白作为免疫原免疫动物制备多克隆抗体,通过抗体与磁珠的偶联获得抗LM免疫磁珠,建立一种免疫磁珠分离技术结合酶联免疫快速检测LM方法。结果表明:建立的免疫磁珠-酶联免疫法,灵敏性为1.2×10~5 cfu/mL,最低检测限为31cfu/mL,其板内变异系数平均为3.14%,板间变异系数为2.69%,与荧光假单胞菌、大肠杆菌、粪肠球菌交叉反应率均小于0.1%,对样品的平均加标回收率为96.4%。满足LM的检测需要。