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1,5—二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(EC4.1.1.39,RubisCO)是植物光合作用的关键酶。按前人方法纯化45%—55%(NH4)2SO4沉淀下的RubisCO(RubisCO45%—55%)。在Native-PAGE只呈现Mr457kD;在SDS-PAGE出现55kD/15kD主带。在等点聚焦(IEF)中出现pI4.6,4.8和5.0,表明RubisCO45%—55%为酸性蛋白,与前人报道一致。本文还制备了RubisCO45%—55%抗体、rbcL45%—55%抗体,以及rbcS45%—55%抗体。
菜心绿叶粗蛋白加入(NH4)2SO4分别达到15%、35%、55%、75%饱和度,沉淀的蛋白经SDS-PAGE后都出现55kD/15kD主带;经Native-PAGE都只有一条蛋白主带,该主带除0%—15%(NH4)2SO4沉淀的为501kD外,其余均为457kD。由于RubisCO占绿叶可溶性蛋白50%,rbcL和rbcS的M,分别为55kD和15kD。因此,各个(NH4)2SO4饱和度沉淀的蛋白都含有RubisCO,免疫分析结果进一步说明绿叶中RubisCO存在不同疏水性。
不同疏水性RubisCO具有不同的比活:0%—15%、15%—35%、35%—55%、35%—55%、55%—75%(NH4)2SO4沉淀蛋白的RubisCO分别为5.84、4.29、8.57、4.62nmiol CO2. mg—1 protein.min—1;35%—55%(NH4)2SO4沉淀蛋白的RubisCO比活最高。进一步研究高疏水性、低活性的RubisCO0%—15%的性质。发现当加大上样量,在制备性Native-PAGE中0%—15%(NH4)2SO4沉淀蛋白中含有三种不同Mr的蛋白。在SDS-PAGE Western blot中,RubisCO45%—55%抗体均识别这三种蛋白,按Mr命名为RubisCO501(Mr>501kD)、RubisCO501(Mr=501kD)和RubisCO<501(Mr<501kD)。IEF证实RubisCO501在pI9.8和pI9.1各出现一条蛋白带,表明其为碱性蛋白。RubisCO501与RubisCO45%—55%氨基酸组成具有很大的差异,解释了二者在疏水性、Mr和pI的差异。
乙醇酸氧化酶(EC1.1.3.15)是光呼吸的关键酶。本文发现GO与RubisCO可以共纯化,得到GO—RubisCO混合物。其中的RubisCO的Mr=450kD,pI>8.3,命名为RubisCO450,且放置后RubisCO450的pI会下降。