【摘 要】
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该研究对广东省广州、深圳、云浮、汕头等地送检的1000多份家禽及多种禽类野生动物的脏器组织及喉头拭子样品进行常规处理后,接种SPF鸡胚,盲传3代进行病毒分离.通过对接种鸡
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该研究对广东省广州、深圳、云浮、汕头等地送检的1000多份家禽及多种禽类野生动物的脏器组织及喉头拭子样品进行常规处理后,接种SPF鸡胚,盲传3代进行病毒分离.通过对接种鸡胚病变观察以及对收获的鸡胚尿囊液进行RT-PCR检测,共分离到四株冠状病毒,其中孔雀样品分离到1株病毒,鹧鸪样品分离到1株病毒,黄羽肉鸡样品分离到2株病毒.分离到的四株冠状病毒的RT-PCR检测结果为:冠状病毒通用引物和IBV 3UTR引物检测结果为阳性;SARS-CoV聚合酶1b高保守区特异性引物检测结果为阴性.为了更加深入了解野生动物的冠状病毒分离株与鸡传染性支气管炎病毒的亲源关系,该实验系统性的研究了孔雀分离株和鹧鸪分离株的生物学特性,并对两株病毒进行了全基因组序列分析.在对生物学特性的研究中发现:两毒株对鸡胚有强致矮小化作用;未处理的病毒尿囊液不具血凝性,而胰酶处理后病毒株均具有较高滴度的血凝性;对NDV-Ⅱ疫苗毒存在明显的干扰效应.生物学试验表明两毒株都具有传染性支气管炎病毒典型的生物学特性.全基因组序列分析:孔雀分离株包括poly(A)尾在内全长27434bp,鹧鸪分离株包括poly(A)尾在内全长27503bp.将两毒株的结构基因分别和GeneBank资源库中报道序列进行同源性比较发现:孔雀分离株的主要结构结构基因都和Mass型的M41有高度的同源性,而鹧鸪分离株的主要结构基因与其他IBV毒株的同源性却较低,两病毒分离株间的同源性也较低.从该研究结果看,孔雀分离株应为IBV M41的变异株,而鹧鸪分离株则可能是中国地方毒株和其他IBV毒株同源重组的病毒.
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