论文部分内容阅读
本论文的研究工作分为以下两大部分。在第一部分工作中,我们对FOXC1抑制乳腺癌在体内的肺转移及相关机制进行了研究。在实验室的前期工作中,我们已经证明FOXC1是Polycomb复合物的靶基因,并且可能在MDA-MB-231细胞的体外迁移中起作用,但是对于证明FOXC1在体内转移中的作用却缺乏相关证据。因此,我们通过研究高肺转移的乳腺癌MDA-MB-231HM细胞系,发现FOXC1在MDA-MB-231HM细胞中的表达比其在亲本MDA-MB-231细胞的表达低,这说明FOXC1的下调可能在乳腺癌转移中发挥作用。在MDA-MB-231HM中过表达FOXC1能够抑制细胞的体外的迁移和侵袭。我们在裸鼠体内通过尾静脉注射和乳腺脂肪垫原位注射两种方法,验证了FOXC1过表达能够抑制MDA-MB-231-HM细胞在体内的转移。通过以上体内和体外两种实验,验证了FOXC1在乳腺癌中的作用,并为FOXC1在乳腺癌的临床预后及治疗提供了理论基础。在第二部分工作中,我们对CARM1通过特异性位点甲基化HP1γ抑制肿瘤细胞的衰老和SAHF进行了研究。在实验室前期工作中,我们利用大通量siRNA进行筛选,选出能够参与肿瘤细胞衰老事件的重要基因,并从中选取CARM1(又称PRMT4)基因作进一步研究。研究发现,在衰老的MDA-MB-231及WI-38细胞中检测得出了CARM1明显地下调,并且在MDA-MB-231中过表达CARM1能够抑制阿霉素诱导的衰老及衰老相关的异染色质凝集(SAHF)。为了进一步验证CARM1在衰老及其在SAHF中的作用,我们在MDA-MB-231细胞中下调CARM1后发生了衰老及SAHF现象。而且通过体内的免疫共沉淀实验我们发现,CARM1与HP1γ存在于同一复合物中;通过质谱实验,我们证实HP1γ能够被CARM1甲基化,甲基化位点在HP1γ的第91位的精氨酸。通过点突变抑制HP1γ的91位的精氨酸甲基化,可以诱导MDA-MB-231细胞的衰老及SAHF形成现象,这证明CARM1是通过对HP1γ的91位精氨酸甲基化发挥作用。通过磷酸水解酶和western实验,通过干涉CARM1或者抑制HP1γ的91位点精氨酸的甲基化都检测到HP1γ磷酸化的显著上升。我们的实验证实了CARM1通过甲基化HP1γ的91位点抑制了HP1γ磷酸化,抑制MDA-MB-231的衰老及SAHF现象;当干涉CARM1后,HP1γ的甲基化被抑制了,磷酸化上升,促进HP1γ进入SAHF中起作用。这些结果为揭示CARM1的新功能、HP1γ翻译后修饰的功能,以及乳腺癌的潜在治疗靶标和机制提供了有力的证据。