目的:中药破壁饮片是通过现代粉碎技术将传统中药饮片微粉化加工至粒径为D9。<45μm的粉体,经不添加成型技术制成的颗粒状饮片,为一种新型中药饮片。与传统饮片比较,中药破壁饮片具有以下特点:经破细胞壁处理,提高了有效成分的利用率;质量均一,提高了中药质量的可控性;可直接冲泡服用,应用方式简单、快捷和灵活等。中药破壁饮片的给药方式有三种:既可冲泡饮用,也可煎煮服用,还可以搅拌成混悬状全部服用,目前,中药破壁饮片推荐的主要服药方式为搅拌成混悬液连药渣全部服下。这种服用方式除摄入传统煎煮中药汤剂中的成分外,还将脂溶性成分及植物组织中的糖、蛋白质、脂质和纤维素等也一并摄入。所以研究这种新型饮片及新的服药方式给机体带来的影响或与原汤剂应用方式的差异,对指导中药破壁饮片的正确应用具有重要意义。消化道是药物口服给药的必经路径,因此研究消化道系统的变化及影响是研究药物给药后对机体影响的关键点之一。药物对消化道系统的影响主要体现在:对消化道生理机能的影响,对消化道微生态环境的影响以及对消化道组织本身的影响。目前,关于中药对消化道生理机能及消化道组织本身影响的相关研究报道已较普遍,而对消化道微生态环境影响的研究仍极少。人体微生态系统包括口腔、皮肤、泌尿、胃肠道四个微生态系统,以肠道微生态系统最为主要、最为复杂。人肠道中的细菌细胞数达1014个,占人体总微生物量的78%。肠道菌约400～500种,分为原籍菌群和外籍菌群,原籍菌群多为肠道正常菌群。除细菌外,人体还存在正常病毒群、正常真菌群、正常螺旋体群等,各有其生理作用。经过漫长的生物进化过程,正常菌群与人体处于共生状态,并与人体建立起密切的关系,对促进人体生理机能的完善尤其是免疫功能的成熟起非常重要的作用。它们与机体已形成相互依存、互为利益、相互协调又相互制约的统一。这种统一体现了人类微生态的动态平衡,平衡则健康,失衡则致病。因此肠道菌群最显著的特征之一是它的稳定。本研究通过比较、分析红景天、丹参破壁饮片、传统饮片粗粉和传统饮片给药后对肠道菌群的影响及胃肠道组织的影响,为中药破壁饮片的有效性和安全性评价提供一定的依据。方法:1、观察给药后对肠道致病菌及益生菌的变化:C57BL/6小鼠随机分为空白对照组,各剂量破壁饮片组,传统饮片组和传统饮片粉末组,连续给药14天后,取小鼠回盲部内容物,稀释并均质化后接种于相应培养基中,选择性培养和计数双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌和肠球菌,比较给药前后细菌的变化。2、观察给药后胃肠道组织切片的变化:上述各组动物,取胃部和回盲部组织,用10%甲醛固定及HE染色后,进行病理切片观察。3、观察给药后肠道细菌指纹图谱的变化:C57BL/6小鼠随机分为空白对照组,各剂量破壁饮片组,传统饮片组和传统饮片粉末组,给药结束后,用粪便基因组试剂盒提取回盲部粪便的总DNA,用细菌16S rDNA进行PCR扩增后,利用DGGE进行细菌指纹图谱分析,比较给药前后小鼠肠道细菌种群的变化。结果:1.给药后肠道致病菌及益生菌的变化红景天:(1)红景天各组肠道大肠埃希菌及肠球菌的数量两两比较,均无显著性差异。(2)各给药组的乳酸杆菌数量与空白组的比较,传统饮片组和传统粉末组数量显著减少,破壁饮片各剂量组无显著性差异。(3)各组双歧杆菌数量两两比较,1/8破壁饮片组数量比空白组增多,但差异无意义;传统饮片粉末组数量与空白组比较减少,且差异有极显著意义(P<0.01);各剂量破壁饮片组数量与传统饮片组比较,1/8破壁饮片组数量增加,且差异有极显著意义(P<0.01);各剂量破壁饮片组数量与传统饮片粉末组比较,1/4、1/8破壁饮片组数量增加,且差异有极显著意义(P<0.01)。丹参:(1)丹参各给药组与空白组比较,1/8破壁饮片组双歧杆菌及乳酸杆菌数量极显著高于空白组(P<0.01);等剂量破壁饮片组双歧杆菌数量显著性高于空白组及乳酸杆菌数量极显著高于空白组(P<0.01);1/8破壁饮片组和等剂量破壁饮片组大肠埃希菌和肠球菌数量与空白组比较,无显著性差异;(2)1/8破壁饮片组和等剂量破壁饮片组与传统饮片组比较,1/8破壁饮片组双歧杆菌数量极显著高于传统饮片组(P<0.01);等剂量破壁饮片组双歧杆菌数量显著高于传统饮片组(P<0.05)(3)传统饮片组和传统饮片粉末组双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌及肠球菌与空白组比较无显著性差异(P<0.05)。2.两种药物对胃肠组织的影响红景天:空白组小鼠胃、回肠结构完整,粘膜层、粘膜下层、肌层及浆膜层等各层均完好,各层中特有结构基本完整,未见明显充血、水肿、炎细胞浸润,其他给药组中胃部和回盲部均有少量炎细胞浸润和血管扩张充血的病变,其中1/8破壁饮片组病变最严重,等剂量破壁饮片组、传统饮片组和传统饮片粉末组病变程度相仿。丹参:各组小鼠胃、回肠病理切片结果,发现结构完整,粘膜层、粘膜下层、肌层及浆膜层等各层均完好,各层中特有结构基本完整,未见明显充血、水肿、炎细胞浸润。3.PCR-DGGE指纹图谱结果红景天:细菌指纹图谱分析显示,给药后各组的多样性系数以及物种丰度均比空白组略有增加,其中1/8破壁饮片组的多样性系数以及物种丰度最大,且其物种丰度(S)与空白组相比具有极显著意义(P<0.01);1/4破壁饮片组次之,且与空白组相比具有显著性差异(P<0.05);各剂量破壁饮片组多样性系数以及物种丰度与传统饮片组、传统饮片粉末组对比,1/8破壁饮片组物种丰度均有增加,且差异有显著意义(P<0.05)。各给药组相似性系数分析,各组与空白组均具有一定的相似性(30%-45%),等剂量破壁饮片组与1/2破壁饮片组的相似性最高(64.05%),1/2与1/4破壁饮片组的相似性次之(61.68%),其余各组的相似性均在30%-60%之间。聚类分析显示,各组小鼠细菌组内基本能聚为一族,组间有部分的交叉。丹参:各给药组的多样性指数和物种丰度均高于空白组,其中1/8破壁饮片组和等剂量破壁饮片组的多样性指数和物种丰度最高,其次是等剂量传统粉末组,且丹参各给药组与空白组比较有显著性差异。相似性系数结果中,传统饮片组与空白组相似性最高(50%),1/8破壁饮片组和等剂量破壁饮片组的相似性次之(47%),其他各组之间的相似性在20%-40%之间。聚类分析显示,各组小鼠细菌组内基本能聚为一族,组间有部分的交叉。结论:红景天破壁饮片及丹参破壁饮片均对小鼠肠道菌群无不良影响,在合理使用下还对肠道菌群有正向调整作用。红景天破壁饮片、传统饮片及传统饮片粉末对小鼠胃肠组织具有损伤作用,丹参破壁饮片、传统饮片及传统饮片粉末对胃肠组织则未见损伤。