猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)导致的母猪晚期流产、早产、死胎、木乃伊胎等繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状及高死亡率为特征的传染病。自 1987 年首次暴发本病以来,现已传遍全球,对世界养猪业造成了重大经济损失。该病病毒主要侵害宿主免疫系统,可引起持续性感染,具有抗体依赖性增强作用,且易发生变异重组。我国1995年分离到PRRSV,并将其命名为PRRSV CH-1a 株。GP2 和 GP3 蛋白是该病毒基因组两个结构蛋白,但目前对这两个蛋白在病毒致病过程中的作用还不十分清楚,因此本试验对 PRRSV CH-1a 株的 GP2 和 GP3 蛋白进行了初步研究。 对 PRRSV CH-1a 株的 ORF2 和 ORF3 基因利用软件进行分析后,将其高度疏水区和信号肽部分切除,并在上下游引物中分别引入 BamHI 和 XhoI 位点,经 RT-PCR得到大小分别约为 510bp 和 618bp 的 tGP2 和 tGP3 基因。将目的片段分别克隆于上游融合了 GST 标签的 pGEX6p-1 原核表达载体上,经酶切鉴定和测序正确的克隆命名为 pGEX6p-rtGP2 和 pGEX6p-rtGP3。阳性克隆转化宿主菌 BL21 后,优化诱导表达条件,确定其最佳诱导时间为 4 小时,IPTG 最适诱导浓度为 0.6mM/L。经 SDS-PAGE电泳分析表明获得的重组蛋白 rtGP2 和 rtGP3 分子量大小分别为 40KD 和 42KD。利用 PRRSV 阳性血清对两个重组蛋白进行 Western blot 检测,结果表明二者均可与PRRSV 阳性血清发生特异性反应。对表达蛋白利用带有 GST 标签的亲和层析柱Glutathione Sepharose 4B 进行纯化后,分别以纯化蛋白为抗原免疫 BALB/c 小鼠制备单克隆抗体,同时以 ELISA 方法进行筛选,经过 3~5 轮筛选和纯化,最终获得 1株能够稳定分泌 GP2 特异性抗体的阳性细胞克隆株,命名为 26D8;同时获得 5 株能稳定分泌 GP3 特异性抗体的阳性细胞克隆株,分别命名为 31A2、31G11、32B12、32D4、32H7。利用 PRRSV 感染的 MARC145 细胞进行间接免疫荧光试验,结果表明各株单抗均可与感染细胞发生特异性反应,而正常 SP2/0 细胞培养上清与之反应为阴性。单抗亚型鉴定试验证明各株单抗均为 IgG1 型,其轻链均为κ链。本试验研究结果的获得,为今后对 PRRSV GP2 和 GP3 蛋白结构与功能的研究及该病毒抗原特性的研究奠定了基础。